NA-1（PSD-95抑制剂）对新生小鼠脑缺血缺氧性损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2020-02-24 02:04

【摘要】：中风发生后，谷氨酰盐与N-甲基-D-天冬氨酸受体相互作用引起神经细胞兴奋性细胞毒性，这种兴奋性细胞毒性导致细胞损伤甚至死亡，这点已经是被大家公认的。谷氨酰盐也是大脑中最普遍的神经传导介质，这样适量的N-甲基-D-天冬氨酸受体的激活也是维持生物正常生理的，行为的和意识功能的，同时也是细胞在抵抗中风的必要成分。为了治疗中风而完全阻断N-甲基-D-天冬氨酸受体会产生很多问题的。为了进一步将N-甲基-D-天冬氨酸受体作为治疗的靶点，我们必须进行高度选择，同时还不能影响它的正常功能。突触后密度蛋白95（postsynaptic density-95PSD-95）的成功取得是一个很重要的转折。PSD-95是一个连接骨架蛋白，它将N-甲基-D-天冬氨酸受体和一氧化氮激酶（NOS）连接起来，而一氧化氮激酶（NOS）是调解神经毒性信号。抑制基因水平的表达和在细胞实验中竞争性抑制PSD-95，这两者都通过抑制N-甲基-D-天冬氨酸受体介导的兴奋性毒性和抑制一氧化氮的产生而表现得神经保护作用。它们没有影响到N-甲基-D-天冬氨酸受体的正常功能。这是一种进一步向下游靶向的病理生理途径的元件进行干预，从而了规避阻断受体本身的不利后果。NA-1是突触后密度蛋白95（postsynapticdensity-95PSD-95）的抑制剂，它可以阻断谷氨酸受体下游毒害神经的信号通路而不影响正常谷氨酸受体功能。NA-1已经在成年大鼠、猴子以及人类二期临床研究中证实了它可以减弱谷氨酸受体介导脑卒中后神经细胞死亡数量。然而,它所提供的神经保护作用尚未在新生小鼠缺血缺氧脑损伤模型中测试。本研究中，通过使用改良Rice-Vannucci新生儿缺血脑损伤的方法将出生后7天小鼠幼崽制作成新生鼠缺血缺氧模型，这个模型被用于这项研究。新生鼠给予单剂量腹腔注射NA-1。本研究采用两个不同的时间线：1）右颈总动脉闭塞前20分钟腹腔注射药物；或2）缺血后70分钟，同时也是缺氧前20分钟腹腔注射药物。所有实验都是采用双盲模式进行。然后通过测量手术后1天和7天的脑组织梗死体积;进行了测试术后1、3、7天行为变化来评估NA-1对新生小鼠缺血缺氧性脑损伤的脑保护作用。在缺血前或者缺氧前给予NA-1，均可以显著显著降低脑梗死体积和改善神经行为结果。延伸到术后3和7天结果表明NA-1是有效地降低新生儿卒中损伤。该研究表明NA-1将有望成为治疗新生儿缺血缺氧脑病的药物。该研究将为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤提供新的治疗方案及理论基础。
【图文】：

免疫荧光染色,原代培养,双染色

tublin 和 pholloidin 双染色 neun 染色 Map2 和 tau-1 双染色图 4.13 原代培养神经元细胞免疫荧光染色（200 ×）.3 NA-1 在 OGD 诱导的体外细胞损伤的保护作用OGD 20-24 小时后皮质细胞免疫荧光染色，，DAPI 染细胞核。对照组 PI 阳性细胞 PSD95 组（100×）p<0.05。

皮质神经元,培养细胞,细胞,双染色

图 4.12 所培养细胞富含皮质神经元细胞（>85%）（200 ×）。所培养神经元如下图所示，图片展示为共聚焦显微镜下脑皮质细胞，图 A 中pholloidin 染成红色，tublin 染成绿色；图 B Neun 阳性细胞为绿色；图 C Map染成绿色，tau-1 染成红色。tublin 和 pholloidin 双染色 neun 染色 Map2 和 tau-1 双染色
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742

【参考文献】