注射用丹参多酚酸介导PIDD通路改善大鼠缺血性脑损伤的机制研究

发布时间：2020-03-31 12:50

【摘要】：目的探讨注射用丹参多酚酸(Salvianolate,SLI)介导PIDD通路改善大鼠缺血性脑损伤的机制方法选择40只健康雄性SD大鼠,随机均分为4组:假手术组、模型组、SLI组、抑制剂组,每组10只,其中抑制剂组所用药物为P53诱导的死亡结构域蛋白(P53-induced protein with a death domain,PIDD)的特异性抑制剂BubR1(Bub-ralated1)。假手术组大鼠,仅分离出右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉,不做手术处理,其余三组均采用改良线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉闭塞模型(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)。待模型建立成功后,SLI组进行丹参多酚酸治疗,抑制剂组注入丹参多酚酸和抑制剂,假手术组及模型组注入等量生理盐水,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot法检测各组大鼠缺血再灌注后不同时间点(1 d、3 d、7 d)脑组织匀浆中PIDD mRNA及蛋白表达变化以及缺血再灌注后7d caspase-2、t-BID、cytochrome-c、caspase-3蛋白表达。于缺血再灌注后1 d、3 d、7 d对大鼠进行神经功能缺损评分,采用改良神经功能缺损评分法(modified Neurological Severity Score,mNSS)。取缺血再灌注后7d脑组织行HE染色观察脑组织病理学变化,以及采用TUNEL法检测神经细胞凋亡情况。结果1、各组缺血再灌注1d时mNSS评分比较无明显差异(P0.05);与模型组相比,SLI组在缺血再灌注后3 d、7 d时神经功能缺损评分明显降低(P0.01),与抑制剂组相比,SLI组缺血再灌注后3 d、7 d神经功能缺损评分高于抑制剂组(P0.01);2、与假手术组相比,模型组1d、3d、7d PIDD mRNA及蛋白表达量明显增高(P0.01)。SLI组缺血再灌注后1d、3d、7d PIDD mRNA及蛋白表达量明显低于模型组(P0.01),其中缺血再灌注后1d PIDD mRNA明显低于模型组;抑制剂组缺血再灌注后1d、3d、7d PIDD mRNA及蛋白表达量高于SLI组(P0.01),其中缺血再灌注后1d PIDD mRNA明显低于丹参组及模型组。3、与假手术组相比,模型组缺血再灌注后1d、3d、7d caspase-2、t-BID、cytochrome-c、caspase-3蛋白表达明显增高(P0.01);SLI组缺血再灌注后3d、7d caspase-2、t-BID、cytochrome-c、caspase-3蛋白表达明显低于模型组(P0.01),抑制剂组缺血再灌注后1d、3d、7d caspase-2、t-BID、cytochrome-c、caspase-3蛋白表达高于抑制剂组(P0.01)。4、缺血再灌注后7d假手术组神经细胞形态无明显病理学变化,神经细胞形态未见明显水肿、坏死,形态基本正常,细胞结构较为紧密,排列也较为整齐,未见TUNEL阳性细胞,其余三组均出现了不同程度的神经细胞凋亡情况,模型组脑缺血周围组织坏死较多,神经细胞大小不一,排列紊乱,可见变形萎缩,神经元密度相对较低;抑制剂组神经细胞凋亡情况最轻,凋亡指数明显低于模型组和SLI组(P0.05),SLI组细胞凋亡情况介于抑制剂组和模型组之间,TUNEL阳性细胞明显低于模型组(P0.05)。结论1、大鼠脑缺血性再灌注后脑组织PIDD表达明显增高;2、注射用丹参多酚酸改善大鼠脑缺血再灌注损伤可能与抑制PIDD/caspase-2/t-BID/cytochrome c/caspase-3信号通路有关。
【图文】：

扩增曲线,抑制剂,丹参,两两比较

模型组、丹参组与抑制剂组三组两两比较有显著性（P＜0.01），，但抑制剂组与假手术组 1d、7d 两两比较差异无显著性(P>0.05) ；丹参组 1d、3d、7d PIDD mRN表达均明显低于模型组（P＜0.01）；抑制剂组 1d、3d、7d PIDD mRNA 表达显著低于丹参组及模型组（P＜0.01），见表 2、图 1、图 2。表 2 各组不同时间点脑组织缺血区脑组织 PIDD mRNA 表达水平比较（x ±S,n=10组别 1d 3d 7d假手术组 1.00±0.15 1.00±0.15 1.00±0.15模型组 4.10±0.39** 3.16±0.30** 1.86±0.22**丹参组 2.59±0.19**##2.61±0.30**##1.60±0.16**##抑制剂组 1.24±0.19** 1.23±0.26** 1.37±0.28**与假手术组比较,**P＜0.01;与抑制剂组相比,##P＜0.01

溶解曲线,丹参,脑组织,蛋白表达

图 2 PIDD 依次在 1、3、7d 时溶解曲线Figure 2 PIDD alpha dissilution curve in 1,3,7d2.3 各组不同时间点缺血区脑组织 PIDD、 caspase-2、t-BID、cytochrome-caspase-3 的蛋白表达量采用 Western blot 法检测缺血区脑组织 PIDD、 caspase-2、t-Bcytochrome-c 、caspase-3 的蛋白表达量，结果如下：模型组、丹参组和抑组 PIDD 1d、3d、7d 蛋白表达均高于假手术组，差异有统计学意义（F=663.231.584、182.711，P＜0.01），丹参组 PIDD 1d、3d、7d 蛋白表达显著低于组但高于抑制剂组（F = 67.700、141.168、871.009，P＜0.01），三组两两
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743

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