Twist2促进人脑胶质瘤细胞株U87、T98G侵袭及迁移能力的研究

发布时间：2020-04-03 00:57

【摘要】：目的:研究人脑胶质瘤细胞株中Twist2的表达水平;探讨Twist2影响胶质瘤侵袭及迁移的可能机制是否为上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)。方法:1、通过q-PCR检测人脑胶质瘤细胞株U87、T98G、H4、U118和SHG44中Twist2 mRNA表达水平。2、过表达Twist2基因质粒慢病毒感染人脑胶质瘤细胞株U87和T98G。每组细胞株分为三组:第一组:空白组(Blank);第二组:过表达阴性对照组(NC-ox);第三组:过表达Twist2基因组(Twist2-ox)。3、CCK-8法、Transwell小室侵袭、Wound healing实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。4、裸鼠成瘤体内实验检测各组细胞侵袭和迁移能力。5、Western blot检测EMT相关蛋白:E-钙粘连蛋白(E-cadherin)、N-钙粘连蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和纤维连接蛋白(Fibronectin)的表达水平。结果:1、人脑胶质瘤细胞株U87、T98G、H4、U118和SHG44中均存在Twist2 mRNA的表达,其中U87和T98G的表达量相对较低。2、CCK-8法显示,过表达Twist2组细胞增殖能力无明显变化,差异无统计学意义;Transwell小室侵袭、Wound healing实验显示Twist2组侵袭及迁移能力增强,差异有统计学意义。3、体内裸鼠成瘤实验,过表达Twist2基因组中瘤体体积更大、生长速度更快,差异具有统计学意义。4、Western blot实验:过表达Twist2组E-钙粘连蛋白(E-cadherin)表达量显著降低,差异有统计学意义;而N-钙粘连蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和纤维连接蛋白(Fibronectin)表达量显著上升,差异有统计学意义。结论:Twist2促进人脑胶质瘤细胞株U87和T98G的侵袭和迁移能力的可能机制是EMT。
【图文】：

观察 Twist2 基因在各组人脑胶质瘤细胞株 U87、T98G、H4、U118、STwist2 mRNA 的表达情况 RQ 值（各组细胞的目的基因与内参 GAPDH 的相对表达量.0 进行方差分析。-PCR 检测各组人脑胶质瘤细胞株 Twist2 mRNA 的表达情脑胶质瘤细胞株 U87、T98G、H4、U118 和 SHG44 中 Twist2 在 U87 和 T98G 两株细胞株中 Twist2 mRNA 表达量较其它细 U87（1±0），T98G（1.006±0.1351），H4（1.643±0.536819±0.875029），SHG44（5512.655±664.9427）。

观察 Twist2 基因对人脑胶质瘤细胞株 U87 和 T98G 侵袭和迁移能力个/ml（T98G），倒置荧光显微镜观察所感染细胞的荧光强下图所示：两株人脑胶质瘤细胞株在慢病毒感染 24h 时荧光微弱，72h 时荧光亮度增强且荧光点密度较大，但人 在慢病毒感染 96h 时荧光亮度及荧光点密度比慢病毒感染 胶质瘤细胞株 T98G，在慢病毒感染 96h 时的荧光亮度及h 时相比较，差异无统计学意义；综合考虑，人脑胶质瘤细 MOI 值均等于 15 时，为最佳感染值。U87 (图 3-1A)，，T98G（A
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.4

【参考文献】

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本文编号：2612697