M型钾离子通道开放剂对大鼠脑梗死再灌注损伤的脑保护作用

发布时间：2020-04-10 23:14

【摘要】：目的探讨M型钾离子通道开放剂瑞替加滨(Retigabine,RTG)对大鼠脑梗死缺血再灌注损伤的脑保护作用。方法采用雄性SD大鼠为研究对象,选取90只,年龄8周龄,体重240~260g。通过线栓法暂时造成大鼠右侧颈总动脉/大脑中动脉闭塞(MCAO)诱发梗死灶。SD大鼠共分为6组:假手术(Sham)组、模型对照(MCAO)组、RTG0h治疗组、RTG1h治疗组、RTG3h治疗组和RTG6h治疗组。Sham组将大鼠麻醉后,只将其右侧大脑中动脉分离,不插入线栓,经尾静脉给与等量的生理盐水。MCAO组将大鼠麻醉后,将线栓插入右侧大脑中动脉,堵塞血管,60min后拔出线栓,恢复血流,制备大鼠右侧大脑中动脉阻塞模型。RTG治疗组大鼠在成功制备MCAO模型后,分别在再灌注后0h、1h、3h及6h经尾静脉注射M型钾离子通道开放剂瑞替加滨(10mg/kg)。在局部缺血和再灌注的第一个小时期间,通过加热垫将大鼠核心体温维持在37℃。在给药处理24小时后对各组大鼠进行神经功能评分,TTC染色检测脑梗死面积,免疫组化染色检测缺血半影区星形胶质细胞数量、凋亡细胞的数量以及脑梗死皮质区神经元的密度,western blot检测缺血半影区小胶质细胞的数量。结果1神经功能缺损评分及脑梗死面积:假手术组大鼠脑组织未发现脑梗死病灶,神经功能正常。MCAO组及RTG治疗组大鼠右侧大脑中动脉供血区域可见不同程度的脑梗死病灶,同时各组大鼠左侧肢体出现不同程度的神经功能缺损症状。与MCAO组比较,RTG治疗组脑梗死面积与Longa评分明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与RTG6h治疗组比较,RTG0h治疗组、RTG1h治疗组及RTG3h治疗组大鼠脑梗死面积及神经功能缺损评分降低更为明显,差异有统计学意义(P0.05)。2 HE染色:Sham组大鼠海马CA1区神经元无水肿,形态正常,细胞排列紧密。MCAO组及RTG治疗组大鼠海马CA1区神经元出现明显的水肿与坏死,但是在RTG治疗组中,各组大鼠神经细胞的损伤明显减轻。3免疫组化染色:Sham组大鼠缺血半影区GFAP阳性细胞和caspase-3阳性细胞少见,皮质区神经元排列致密。在MCAO组及RTG治疗组中,缺血半影区GFAP阳性细胞和caspase-3阳性细胞数量明显增加,梗死皮质区Neun阳性细胞数量明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。与MCAO组比较,RTG治疗组大鼠缺血半影区GFAP阳性细胞和caspase-3阳性细胞数量明显减少,梗死皮质区Neun阳性细胞数量明显增多,差异有统计学意义(P0.05)。与RTG6h治疗组比较,RTG0h治疗组、RTG1h治疗组及RTG3h治疗组缺血半影区GFAP阳性细胞和caspase-3阳性细胞数量明显减少,梗死皮质区Neun阳性细胞数量明显增多,差异有统计学意义(P0.05)。4 Western blot:Sham组大鼠缺血半影区无CD11b蛋白表达,在MCAO组及RTG治疗组中,缺血半影区CD11b蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。与MCAO组比较,RTG治疗组大鼠缺血半影区CD11b蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。与RTG6h治疗组比较,RTG0h治疗组及RTG3h治疗组大鼠缺血半影区CD11b蛋白的表达明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论1 M型钾离子通道开放剂能够减少大鼠脑梗死面积及神经功能缺损评分,减轻缺血半影区星形胶质细胞及小胶质细胞的增殖与活化,同时减少缺血半影区神经细胞的凋亡。2在缺血再灌注后6h给药,M型钾离子通道开放剂对大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护会减弱。
【图文】：

HE染色,神经细胞,深染,水肿

无坏死。在模型对照组及RTG治疗组中，神经细胞不同程度发生坏死，细胞水肿，，细胞排列紊乱，细胞核深染、破碎。但是RTG各治疗组海马CA1 区神经细胞的水肿及坏死较MCAO组减轻（见图1）。

免疫组化,给药,星形胶质细胞,统计学意义

各治疗组大鼠梗死周围区星形胶质细胞数增殖明显减少，且形态变化小，差异有统计学意义（P<0.05）。与RTG6h给药组相比，RTG0h给药组、RTG1h给药组及RTG3h给药组星形胶质细胞数明显减少，差异有统计学意义（P<0.05），（见图2，表2）。结果提示M型钾离子通道开放剂能够抑制脑梗死缺血再灌注损伤大鼠梗死周围区星形胶质细胞的增殖与活化，并且，当在再灌注后6h给药，这种治疗作用会减弱。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R743.3

【参考文献】