脑脊液中蛋白和miRNA标志物检测在脑出血疾病诊断中的临床应用研究

发布时间：2020-04-12 02:04

【摘要】：目的:通过观测脑出血患者脑脊液(CSF)中生化指标和miRNA表达变化,在蛋白水平和核酸水平层面筛选可用于脑出血疾病辅助诊断的CSF标志物,进而评估其临床应用价值。方法:选取脑出血(ICH)疾病患者26例,依据格拉斯哥评分(GCS)将其分为轻度ICH组(13例)、重度ICH组(13例),同时选取22例同期排除脑部疾病的住院患者作为对照组。采集各组研究对象入院48h内CSF样本3~5ml,按实验目的和要求对原始样本行前处理制备待试样本。在蛋白水平层面:采用全自动生化分析仪和化学发光免疫分析仪检测β_2微球蛋白(β_2-MG)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸(LAC)、乳酸脱氢酶(LD)、微量白蛋白(mAlb)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和星形胶质源性蛋白(S100B)水平的表达变化,评估上述指标诊断脑出血疾病的价值;在核酸水平层面:以cel miRNA-39为外参,应用qRT-PCR方法检测文献报道的与中枢神经系统疾病相关的15个靶标miRNA,观察各靶标miRNA在脑出血疾病中的表达变化、评估其诊断价值,进而应用生物信息学分析方法预测潜在与脑损伤相关的靶基因。结果:在蛋白水平层面:与对照组相比,轻度ICH组、重度ICH组CSF中LD、GLU、CL表达变化无统计学差异(P0.05);mAlb、PRO、清蛋白指数(QAlb,QAlb=CAlb/SAlb)水平在轻、重度ICH组中显著升高(P0.05),但随ICH损伤程度变化不大;而NSE、S100B、β_2-MG、AST、LAC水平在轻、重度ICH组中显著升高(P0.05),并随ICH损伤程度呈现增高趋势。基于前期预实验结果,并结合相关文献报道,选择S100B、NSE作为下一步研究对象。对二者行ROC曲线分析,结果显示NSE、S100B诊断ICH的曲线下面积、敏感度、特异度分别为0.931[95%CI:0.857~0.892]、80.8%、95.5%和0.795[95%CI:0.670~0.921]、76.9%、77.3%;两者联合检测在特异度与单项检测相当(73.8%)的前提下,可提高诊断ICH的AUC至0.965,敏感度至95.6%。进一步的研究显示,NSE的水平与ICH患者出血量显著相关(r=0.86;P0.05),S100B的水平与ICH患者出血量呈弱相关(r=0.49;P0.05);NSE、S100B与Qalb存在正相关关系(r分别为0.443、0.606)(P0.05),提示二指标与血脑屏障损伤相关;另外NSE、S100B表达水平与NIHSS评分均呈正相关(r分别为0.596、0.615)(P0.05),提示S100B、NSE蛋白可用于脑出血神经功能缺损评估,进一步对其诊断效能进行分析,结果显示S100B、NSE鉴别低、高NIHSS评分组脑出血疾病的敏感度分别为78.9%、80.8%,特异度分别为73.3%、55.2%,二指标联合检测可显著提高敏感度至95.9%(P0.05)。在核酸水平层面:ICH患者miR-124-3p、miR-146a-5p表达显著上调,进而分析其在诊断ICH的效能,结果显示:miR-124-3p、miR-146a-5p诊断ICH的AUC、敏感度、特异度分别为0.667[95%CI:0.512~0.822]、68.8%、81.8%和0.878[95%CI:0.776~0.844]、50.1%、86.4%,二者联合可提高诊断ICH的敏感度至84.4%;进一步的生物信息学分析结果显示:miR-124-3p可预测到91个靶基因,miR-146a-5p可预测到126个靶基因,其中包括SERP1、PDCD6、VEGFR-2,提示miR-124-3p、miR-146a-5p可能参与细胞凋亡、炎症反应、血管内皮的损伤与修复过程。结论:1.脑脊液中NSE、S100B水平可用于脑出血实验室辅助诊断,其表达变化可反映脑损伤严重程度;2.脑出血患者脑脊液中miR-124-3p、miR-146a-5p表达显著上调,两者联合检测可用于ICH的实验室辅助诊断;3.miR-124-3p、miR-146a-5p可能参与脑损伤病理生理过程。
【图文】：

CT检查,患者,脑损伤,标志物

监测；临床上常用的神经功能评分虽然简捷、易行，但无法客观反应病此，，脑出血疾病的早期诊断及客观的病情评估成为临床关注的焦点和热伤标志物有可能是解决这一问题的关键，相对于全血、血浆或血清而言白标志物可更直接、客观的反映脑损伤及脑损伤严重程度。研究，在蛋白水平层面，采用全自动生化分析仪和化学发光免疫分析仪检（β2-MG）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸（LAC）、乳酸脱氢酶（白（mAlb）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、星形胶质源性蛋白（S100变化，评估上述指标在脑出血疾病中的诊断价值，旨在为脑出血的早期情评估遴选临床检验诊断指标提供实验室参考。一、材料与方法对象基本资料取 2017 年 3 月至 2018 年 9 月期间在本院神经外科确诊的的新发 ICH 2例组（其中包括基底节出血 16 例）。平均年龄 56.35±13.90 岁，其中包括和 10 名女性患者，脑出血典型病例 CT 检查结果见图 1。

相关性分析,出血量,效能分析,弱相关

图 2 CSF-NSE、S100B 单独和联合检测的诊断脑出血的效能分析Figure 2 Efficacy analysis of CSF-NSE, S100B alone and combined detection fordiagnosis of ICH4. CSF-NSE、S100B 表达变化与脑出血量的相关性分析应用 Pearson 直线相关分析 CSF-NSE、S100B 水平的表达变化是否与脑出血量有联，结果显示，CSF-NSE 水平与 ICH 患者出血量显著相关（r=0.86; P<0.01，图 3A）CSF-S100B 水平与 ICH 患者出血量呈弱相关（r=0.49; P<0.05，图 3B）。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743.34

【参考文献】