小胶质细胞TRIF信号在帕金森病发生中的作用及机制

发布时间：2017-03-23 03:01

  本文关键词：小胶质细胞TRIF信号在帕金森病发生中的作用及机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种慢性的神经系统退行性疾病,它的病因至今未明。尸体解剖、遗传学调查、回顾性研究和分子影像学诊断均提示炎症反应在PD的发生发展中起到了重要作用。小胶质细胞是参与中枢神经系统炎症反应的主要免疫细胞,具有炎症调理、免疫监视和识别吞噬等功能。经典活化的M1型小胶质细胞,通过释放大量的前炎性因子和氧自由基等,加重神经元的损伤;经替代激活途径活化的M2型小胶质细胞,可与M1型细胞相拮抗,抑制炎症反应,从而减轻神经毒性。Toll样受体是在神经系统主要表达于小胶质细胞的天然免疫受体,其下游TRIF信号的活化可能与小胶质细胞M1/M2表型转化的内在调控密切相关。目的:研究TRIF信号与小胶质细胞迁移活化及向不同表型转化的关系,探讨共培养体系中小胶质细胞对损伤的多巴胺能神经元的作用及特定蛋白表达水平的影响。方法:1.利用si RNA转染小胶质细胞BV2细胞系,获得TRIF表达量特异性下降的小胶质细胞。Western blot和荧光定量PCR技术检测转染24小时后的小胶质细胞TLR3-TRIF信号通路相关蛋白及下游细胞因子的表达情况。2.使用Transwell共培养体系观察TRIF分子是否影响小胶质细胞的迁移能力。3.使用荧光定量PCR检测小胶质细胞M1/M2活化表型及TRIF敲降是否影响小胶质细胞表型转化。4.应用免疫荧光化学、流式细胞术等方法观察共培养体系中小胶质细胞对MPP+引起的多巴胺能神经元凋亡的影响。5.使用Western blot技术检测与小胶质细胞共培养的多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶及多巴胺转运体的表达。结果:1.Western blot结果显示,si RNA转染BV2细胞24小时后,TLR3-TRIF信号通路中TRIF、P-IRF3的表达均有下降(P0.05),q PCR结果表明BV2细胞IFN-β的表达在对照组呈逐渐上升趋势,而在si TRIF组则呈平稳态势,同一时间点与si NC组相比具有显著差异(P0.05)。2.Transwell共培养实验证明,BV2细胞受MN9D细胞损伤激活后,si NC组BV2细胞迁移至transwell膜另一侧的细胞数显著多于si TRIF组(P0.01)。3.q PCR实验结果表明,受MN9D细胞损伤激活或LPS(M1型细胞诱导剂)/IL-4(M2型细胞诱导剂)诱导后,TNF-α、IL-6、CD86、i NOs等M1型小胶质细胞标志物及IL-10、CD206、Arg1、YM1等M2型小胶质细胞标志物的表达在si NC细胞组随时间上升趋势明显,而在si TRIF组变化不大,同一时间点相比存在显著差异(P0.01)。4.细胞免疫荧光染色和流式细胞术检测均发现,共培养体系中si TRIF组BV2细胞对于MN9D细胞的凋亡和损伤作用较si NC组更为明显(P0.05)。5.Western blot结果显示,BV2细胞与MN9D细胞共培养体系中,si NC组MN9D细胞酪氨酸羟化酶及多巴胺转运体的表达量与si TRIF组相比具有差异(P0.05)。主要结论:1.敲降小胶质细胞TRIF信号可以降低多巴胺能神经元损伤刺激下小胶质细胞的迁移活性。2.敲降小胶质细胞TRIF信号可以影响多巴胺能神经元损伤刺激及诱导剂诱导的小胶质细胞表型转化,减弱小胶质细胞活化效应。3.敲降小胶质细胞TRIF信号可以加重共培养体系中多巴胺能神经元的损伤,同时影响多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺转运体的蛋白表达。
【关键词】：PD 小胶质细胞 细胞表型 TRIF 多巴胺能神经元
【学位授予单位】：成都医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.5
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-15
• 第一部分 TRIF信号对小胶质细胞迁移活化及表型转化的作用15-37
• 1 材料与方法15-28
• 1.1 实验材料15-19
• 1.2 实验方法19-28
• 2 实验结果28-34
• 2.1 siRNA干扰TRIF在BV2 细胞中的表达可部分阻断PolyI:C对TLR3-TRIF信号通路及下游因子的激活效应28-29
• 2.2 敲降TRIF阻碍体外PD损伤模型中BV2 细胞的迁移29-31
• 2.3 敲降TRIF阻碍体外PD损伤模型中BV2 细胞的表型转化31-32
• 2.4 敲降TRIF阻碍IL-4/LPS诱导的BV2 细胞向不同表型转化32-34
• 3 讨论34-36
• 4 小结36-37
• 第二部分 TRIF信号介导小胶质细胞表型转化对多巴胺能神经元的作用与机制探讨37-45
• 1 材料与方法37-40
• 1.1 实验材料37-38
• 1.2 实验方法38-40
• 2 实验结果40-43
• 2.1 敲降TRIF加重共培养体系中MPP+损伤引起的MN9D细胞凋亡40-42
• 2.2 敲降TRIF影响共培养体系中MPP+损伤的MN9D细胞某些特定蛋白的表达42-43
• 3 讨论43-44
• 4 小结44-45
• 参考文献45-50
• 文献综述50-60
• 参考文献56-60
• 附录60-62
• 攻读学位期间的研究成果62-63
• 致谢63

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杜一星,王伟;小胶质细胞的活化与调控[J];国外医学(脑血管疾病分册);2004年08期

2 李小媚;李爱萍;;小胶质细胞的发育和功能[J];解剖学研究;2010年03期

3 杨逢春;显示小胶质细胞方法的改进[J];解剖学研究;2002年02期

4 袁琼兰,郭勇,王琼,邓莉,高小青,余鸿,古元;小胶质细胞培养、分离、纯化和鉴定的初步研究[J];泸州医学院学报;2002年05期

5 刘锋,朱长庚;小胶质细胞激活的分子机制[J];解剖科学进展;2003年02期

6 蒋平,彭艳,倪健,向正华,焦炳华;小胶质细胞蛋白质组三维分离方法的建立[J];第二军医大学学报;2005年06期

7 熊怀林,范光碧,胡兴宇;小胶质细胞在脑缺血中的作用[J];四川解剖学杂志;2005年02期

8 魏桂荣,张敏,董继华,梅元武,刘仁刚;构建一种高产量小胶质细胞体外纯化培养的方法(英文)[J];中国临床康复;2005年21期

9 赵洋;孙素真;;小胶质细胞和癫痫[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2008年01期

10 王均辉;孙峰波;秦绿叶;岳鑫;于常海;;异常活化的小胶质细胞的特征与功能[J];生理科学进展;2008年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 韩书珍;李雪梅;牛文泽;陈翔;王果;李泽宜;;激光扫描共聚焦显微镜观察大鼠局灶性脑缺血半暗区内小胶质细胞的变化及意义[A];第六届江浙沪儿科学术会议暨儿科学基础与临床研究进展学术班论文汇编[C];2009年

2 李捷;刘勇;张蓬勃;肖新莉;吕海侠;李敏杰;康前雁;邓美英;;大鼠局灶性脑缺血后小胶质细胞的来源[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

3 贾思远;雷露雯;王克万;王勇;;烟碱型乙酰胆碱受体在离体海马小胶质细胞上的表达与定位[A];广东省药学会2009学术年会论文集[C];2010年

4 刘锋;朱长庚;刘庆莹;;小胶质细胞的激活及其在致痫过程中的作用机制[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

5 赵天智;;血清白蛋白刺激小胶质细胞前炎症细胞因子表达的作用研究[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年

6 赵敏;袁云;赵培园;李t，

本文编号：262759