KLF11基因敲除对小鼠局灶性脑缺血损伤的影响
发布时间：2020-04-28 17:30
【摘要】：研究背景:缺血性脑卒中(Ischemic stroke)具有高发病率、高致死率和高致残率的特点,是严重威胁人类健康的常见疾病之一。缺血性脑卒中涉及一系列复杂的病理生理过程,激活多种细胞或分子信号级联反应,最终导致神经细胞的死亡。但,其病理生理机制尚未明确。转录因子的功能紊乱参与多种神经系统疾病的发病过程,越来越多研究证实,转录因子及其相关基因的信号通路网络在卒中引起的缺血损伤和神经血管恢复中起重要的调节作用。Krupple-样因子(Kruuppel-like factors,KLFs)是一类具有锌指结构域的核转录因子。KLFs参与多种基因表达的转录调控过程,涉及生长、分化、增殖、凋亡、代谢和炎症等多种病理生理过程。近年来,越来越多的研究发现KLF家族参与了多种血管疾病相关病理过程。目的:探究KLF11基因敲除对小鼠缺血性脑卒中的影响及其可能相关的病理过程。方法:将小鼠随机分为野生对照组(wild-type,WT)和KLF11基因敲除组(knock out,KO)。使用大脑中动脉阻塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导小鼠脑梗死模型、利用散斑脑血流仪监测术中小鼠脑血流的变化及术后的再灌注情况。利用TTC染色法评定KLF11基因敲除对术后小鼠脑梗死体积的影响;三种感觉运动行为法:Rotarod实验、Footfault实验、Adhesive tape romoval实验来检测小鼠术后神经功能缺损情况;干湿重法测量KLF11基因敲除对小鼠术后脑水肿的影响;使用伊文氏蓝(Evans Blue)和荧光素标记的Dextran(TMR-Dextran)检测两组小鼠术后血脑屏障(bloodbrain barrier,BBB)的损伤;利用定量PCR(qPCR)、蛋白质印迹法(WesternBlot)及酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELIS A)检测因子的 mRNA 和蛋白的表达。结果:与WT对照组小鼠相比,KLF11KO组小鼠表现出较高的神经功能评分、更大的梗死体积和更严重的神经行为功能缺失;KLF11 KO组小鼠的梗死侧有更多的伊文氏蓝染料和TMR-Dextran渗漏;KLF11基因敲除后,梗死侧含水量也明显高于WT组;KLF11基因敲除后,梗死侧IL-6的表达显著高于WT组。结论:KLF11敲除会加重小鼠的缺血性脑损伤,加剧BBB的破坏,增加炎症因子IL-6的表达。以上结果提示KLF11在缺血引起的大脑功能紊乱中发挥保护作用。
【图文】：
４．１邋ＫＬＦ家族成员在小鼠缺血性脑损伤皮层中的表达谱逡逑为了探宄ＫＬＦ１１在缺血性脑损伤中的调节作用，本研究首先检测ＫＬＦ家族逡逑１７个成员的ｍＲＮＡ在Ｃ５７鼠脑缺血后皮层中的表达变化情况。结果如下图１Ａ逡逑所示，与Ｓｈａｍ组比，ＭＣＡＯ组小鼠皮层中ＫＬＦ１１的ｍＲＮＡ表达在术后２４小逡逑时后表达下降了近３倍，与此相反，ＫＬＦ２，邋ＫＬＦ４，邋ＫＬＦ９在缺血皮层中的表达逡逑明显升高。相应的，ＫＬＦ１１的蛋白表达量在缺血皮层中也显著下降，而ＫＬＦ２，逡逑ＫＬＦ４，，ＫＬＦ９的蛋白表达量在缺血皮层中明显升高（图１邋Ｂ）。这一结果显示了逡逑１５逡逑
时再灌注处理。２４小时后先进行神经功能评分（Ｃ），然后灌注取脑做ＴＴＣ染色逡逑（Ａ），用ＩｍａｇｅＪ计算梗死体积（Ｂ）。统计结果表明ＫＬＦ１１基因敲除明显增加逡逑小鼠缺血后梗死体积和神经功能评分。数值以平均值±标准误表示，每组８只逡逑小鼠；＞＜邋０．０５与ＫＬＦＷＴ组相比。逡逑４．３邋ＫＬＦ１１基因敲除加剧缺血性脑血管n蛲稿义希拢拢率谴竽匀毖运鹕私显缢鹕说牟课唬拢拢碌墓δ芪陕沂侨毖运鹕艘诲义细龉系纳锉曛荆欤矗常荨１狙芯客ü觳庑∈笫质酰玻葱∈焙笕毖橹幸廖氖侠跺义虾停裕停遥模澹簦颍幔钌┝坷雌拦懒阶樾∈笫鹾螅拢拢碌乃鸹登榭觥Ｈ缤迹乘荆河脲义隙哉兆橄啾龋耍蹋疲保卞澹耍献樾∈蟮墓Ｋ啦嗉觳獾礁嗟囊廖氖侠度玖虾湾义希裕停遥模澹簦颍幔睿庖唤峁砻鳎耍蹋疲保被蚯贸峒又匦∈蠊Ｋ篮蟮模拢拢缕苹怠ｅ义
本文编号：2643695
【图文】：
４．１邋ＫＬＦ家族成员在小鼠缺血性脑损伤皮层中的表达谱逡逑为了探宄ＫＬＦ１１在缺血性脑损伤中的调节作用，本研究首先检测ＫＬＦ家族逡逑１７个成员的ｍＲＮＡ在Ｃ５７鼠脑缺血后皮层中的表达变化情况。结果如下图１Ａ逡逑所示，与Ｓｈａｍ组比，ＭＣＡＯ组小鼠皮层中ＫＬＦ１１的ｍＲＮＡ表达在术后２４小逡逑时后表达下降了近３倍，与此相反，ＫＬＦ２，邋ＫＬＦ４，邋ＫＬＦ９在缺血皮层中的表达逡逑明显升高。相应的，ＫＬＦ１１的蛋白表达量在缺血皮层中也显著下降，而ＫＬＦ２，逡逑ＫＬＦ４，，ＫＬＦ９的蛋白表达量在缺血皮层中明显升高（图１邋Ｂ）。这一结果显示了逡逑１５逡逑
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