【摘要】：研究背景胶质瘤(Gliomas)是最常见的原发性颅内肿瘤,约占成人恶性肿瘤的2%。2007年至2011年,原发性脑瘤的发病率为每10万人21.4例,胶质瘤发病率为每10万人6.6例,约占颅内肿瘤的45%左右,其中约一半为胶质母细胞瘤(Glioblastomas)。胶质母细胞瘤是一种致命性的疾病,大多数患者在确诊后的15-18个月内死亡,只有不到5%的患者可以存活超过5年。即便是在较为有利的临床试验人群中,5年生存率也不会超过10%。目前,恶性胶质瘤的标准治疗方法是最大安全手术切除、术后放疗,然后辅以替莫唑胺(Temozolomide)的辅助化疗。由于恶性胶质瘤的侵袭性生长特点,很少能完全切除。术中荧光引导技术,如5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA),可以提高切除比例,但不能提高恶性胶质瘤患者的总体生存率。自20世纪50年代以来,对颅内肿瘤患者进行了放射治疗,但该技术发展缓慢,其特点之一是抗放射治疗的胶质瘤干细胞。替莫唑胺是目前治疗恶性胶质瘤最常用的有效的化疗药物,但其结果取决于 O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(O6-methylguaninemethyltransferase,MGMT)的启动子甲基化状态。近年来,随着对胶质瘤生物学特征的认识的增加,越来越多的精确靶向治疗成为了研究的热点。但这些研究目前仍处于起步阶段,且基本未进行相关临床试验,未来仍有很长的一段路需要走。这一切都迫切的催促着人们探究胶质瘤发生发展的分子机制,寻找建立新的治疗靶标。CD300A是CD300家族九位成员之一,是一种60-KD I型跨膜糖蛋白受体,包含胞外IgV样结构域、跨膜结构域和在其胞质尾部的三个经典的ITIM基序。许多研究表明CD300A在髓样和淋巴样细胞中都起抑制作用。在中性粒细胞中,CD300A能够抑制CD32a(FcyRIIa)介导的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)产生。CD300A 的活化降低了 Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR-9)诱导的促炎介质表达。在人成熟B细胞中,CD300A被发现作为B细胞受体(B-cellreceptor,BCR)介导的信号传导(如Ca2+动员)中的负调节因子,并且降低CD300A水平促进B细胞增殖。有趣的是,在HIV感染的患者中,B细胞中CD300A的表达水平显著低于健康个体,表明CD300A在HIV感染的B细胞异常中的作用。CD300A含有的胞质区域内的共有的免疫受体酪氨酸抑制基序抑制了 FcεRI介导的信号传导和体外人和小鼠MCs的脱粒。另外,CD300A通过Toll样受体4抑制信号传导并抑制MCs和巨噬细胞体外生产细胞因子和趋化因子。与野生型(Wird type,WT)小鼠相比,CD300A-/-小鼠显示出腹腔细菌清除率提高,CLP术后存活时间延长。类似地,MC缺陷Kitw-sh/W-sh小鼠腹腔注射CD300A-/-的骨髓来源的培养的MCS(BMMCS),相比于腹腔注射WTBMMCS的小鼠,表现出很大改善的细菌清除率和CLP后存活率。表明MCs上的CD300A涉及细菌清除率和存活。人们对CD300A的各方面都知之甚少。虽然明确它属于一组抑制性免疫受体,在髓系和淋巴谱系细胞表面都有差异表达,但有关其在细胞分化、抗原呈递、细胞因子产生、细胞介导的细胞毒性、免疫突触终止等关键免疫功能中的作用尚不可知。CD300A介导的信号转导也是一个非常复杂的过程,涉及许多的参与者。目前仍需要更多的研究来确定参与CD300A信号转导途径的磷酸酶的靶点和独特的下游信号转导成员。研究发现CD300A参与某些人类疾病的发生发展,包括癌症、病毒感染、败血症、自身免疫疾病、炎症和过敏性疾病。但我们在理解CD300A在疾病中的作用及其作为治疗目标的潜力方面仍处于起点。最新的研究表明,CD300A参与血液恶性肿瘤的发展。与正常CD19+CD10+B细胞祖细胞相比,CD300A与其他标记物一起在急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia,ALL)中差异表达。CD300A表达水平更高的患者总体存活时间较短,无复发,提示CD300A可以作为ALL患者临床分级的一种生物标志物。此外,小鼠遗传学研究表明,CD300A通过招募SHP-1和SHIP-1校准致癌信号强度,表明CD300A的靶向可能是治疗ALL的一种策略。虽然CD300A在实体肿瘤中是否发挥作用仍不清楚,但是最近的一项研究表明,CD300A与PS的相互作用抑制了NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。并有多项研究表明,在肿瘤微环境中,酸性、活性氧和短暂缺氧对肿瘤内皮细胞有明显的胁迫作用,导致PS的再分布和暴露。事实上,在胃癌,卵巢癌和黑素瘤中都检测到了 PS的表达。最新研究表明,Mn细胞暴露在缺氧状态可导致细胞内CD300A转录物的增加,其可在3小时内检测到,并且通过再氧合作用抵消。其恢复到常氧细胞的表达水平与HIF-la的积累相关。在髓细胞前体和MDM中也观察到了响应缺氧的CD300A转录物的增加。并且CD300A的激活调节了 Mn细胞中VEGF和CCL20的表达。另外有研究表明CD300A参与了人类Mn细胞中IL-8和MMP9的表达调节。缺氧是绝大多数实体瘤中普遍存在的现象,并与肿瘤的进展和转移密切相关。VEGF的表达与肿瘤内血管形成和血管密度分布有关,还可以刺激内皮细胞的存活,增殖和迁移;MMP-9涉及肿瘤细胞的迁移过程。这些结果侧面表现了 CD300A与实体瘤的发生和发展存在的联系。目的本课题旨在探讨CD300A在人类脑胶质瘤进展中的作用及机制。方法利用基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)中163例多形性胶质母细胞瘤(Glioblastoma multiforme,GBM)样本和相应的207例癌旁组织,以及518例低级别胶质瘤(Lower grade glioma,LGG)样本和相应207例癌旁组织的基因表达数据,分析CD300A mRNA在胶质瘤中的表达变化,并探究CD300A在胶质瘤中的差异表达具有的生物学意义,例如与患者预后的相关性。收集临床胶质瘤组织及正常脑组织样本,通过实时定量PCR、western blot以及免疫组织化学等实验方法检测,CD300A在临床胶质瘤组织及正常脑组织样本中的表达模式。选用胶质瘤细胞系U87和U251作为体外研究细胞模型,通过转染siRNA-CD300A,构建CD300A敲低(siCD300A)细胞株。利用CCK8实验检测CD300A敲低对细胞增殖的影响。使用Transwell实验探究CD300A表达下调对细胞迁移的影响。通过流式细胞术检测CD300A敲低对细胞凋亡的影响,并通过western blot检测凋亡相关蛋白的表达变化。最后,深入探究CD300A在胶质瘤细胞中发挥作用所涉及的信号途径。结果GEPIA分析结果表明CD300AmRNA在胶质瘤中表达显著上调(P0.05),并与胶质瘤患者的总生存率呈负相关(P0.001)。CD300A高表达预示预后不良。临床样本分析结果表明,与正常脑组织样本相比,CD300A在多形性胶质母细胞瘤组织中的mRNA及蛋白表达显著上调(P0.05)。细胞实验结果表明,CD300A的敲低显著抑制了 U87和U251细胞的增殖能力(P0.05)。并且,CD300A敲低的U87细胞的迁移细胞数降低至约1/2(P0.05)。此外,CD300A敲低的U87细胞的凋亡率由23.22 ±2.14%明显增多至55.8±6.73%(P0.01)。CD300A通过调控凋亡相关蛋白的表达诱导细胞凋亡,包括上调促凋亡蛋白caspase3和Bax的表达。机制研究结果表明,CD300A的敲低抑制了 AKT的磷酸化,和AKT信号途径关键下游蛋白P70的表达。结论及意义本研究发现CD300A通过AKT信号途径在胶质瘤进展中发挥促癌作用,在未来可能成为胶质瘤治疗的潜在靶标。
【图文】：
图１邋ＣＤ３００Ａ在多形性胶质母细胞瘤（ＧＢＭ）和低级别胶质瘤（ＬＧＧ）及其逡逑
图２邋ＣＤ３００Ａ在胶质瘤中高表达》ＣＤ３００Ａ在３１例ＧＢＭ肿瘤组织和５例正常脑组织逡逑（Ｎｏｒｍａ丨）中的ｍＲＮＡ表达（Ａ）和蛋白表达（Ｂ／Ｃ）。ＣＤ３００Ａ在１０例ＧＢＭ肿瘤组织逡逑和２例正常脑组织（Ｎｏｒｍａｌ）中的免疫组织化学染色评分（Ｄ）及图片（Ｅ）。＊Ｐ＜邋０．０５。逡逑
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.41
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 胡建宏;王茂林;潘亚文;;高迁移率族蛋白B1在胶质瘤发生发展中的作用及其机制研究[J];国际神经病学神经外科学杂志;2019年02期
2 杨海霞;李晓鸣;;外泌体与胶质瘤关系的研究进展[J];临床与病理杂志;2017年11期
3 秦丽娟;贾永森;赵喜庆;张田;张伟;孙娜;;鸦胆子油乳注射液对胶质瘤细胞侵袭性的影响及其可能机制[J];四川大学学报(医学版);2016年03期
4 齐玲;徐俊杰;纪朋艳;吕士杰;韩磊;王玮瑶;;西兰花多肽抑制胶质瘤细胞生长的机制研究[J];中国药学杂志;2014年12期
5 万政强;陈晨;伏林山;孙关;;吡格列酮对胶质瘤细胞生长的抑制研究[J];东南大学学报(医学版);2013年01期
6 李嗍,王枫,缪珊,骆文静;过量锌对鼠胶质瘤细胞体外生长的影响[J];解放军预防医学杂志;2001年04期
7 杨伟廉,王尧,韦永新,阮长耿,杜子威;抗胶质瘤细胞单克隆抗体SZ-38及其识别抗原的生化特征[J];生物化学杂志;1988年06期
8 斯可哉;;在体外和体内用利血平调节C_6胶质瘤细胞亚系对ACNU的抗药性[J];国外医学(肿瘤学分册);1988年02期
9 杨伟廉;抗胶质瘤细胞单克隆抗体SZ—38及其识别抗原的生化特征[J];苏州医学院学报;1989年01期
10 李方园;高翼之;王世浚;;四种人癌基因在脑瘤中的扩增和重排(摘要)[J];铁道医学;1989年01期
相关会议论文 前10条
1 杨鹏宇;李强;张建生;;雷帕霉素联合尼莫司汀抑制胶质瘤细胞的研究[A];2011中华医学会神经外科学学术会议论文汇编[C];2011年
2 俞文华;车志豪;张祖勇;许培源;陆镛民;傅林;朱强;陈锋;杜权;;骨桥蛋白在胶质瘤细胞中的表达及其信号传导途径[A];2005年浙江省神经外科学术会议论文汇编[C];2005年
3 潘冬生;;多基因修饰胶质瘤细胞疫苗的抗肿瘤免疫反应[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
4 张玉宝;孙金龙;孟祥靖;魏麟;刘广存;崔友强;;胶质瘤细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9的表达及临床观察[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
5 赵世光;;胶质瘤细胞周期动力学研究[A];中国医师协会神经外科医师分会成立大会资料汇编[C];2004年
6 张瑞;胡佩珊;臧清策;岳小飞;周帜;徐晓宇;韩为;张瑞萍;再帕尔·阿不力孜;;基于液相色谱-质谱联用技术的胶质瘤细胞代谢组学分析[A];中国化学会第十一届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会（大会特邀报告及墙报）论文摘要集[C];2016年
7 宋杨英;刘英姿;单保恩;;IL-18基因转染对大鼠9L胶质瘤细胞生长特性的影响[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
8 杨孔宾;赵世光;刘炳学;陈晓丰;戴钦舜;;K~+通道阻断剂四乙胺对大鼠胶质瘤细胞的增殖和凋亡影响[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年
9 李格;黄益玲;;MiR-19a靶向LRIG1对脑胶质瘤发生发展的影响[A];中国生物化学与分子生物学会第十二届全国会员代表大会暨2018年全国学术会议摘要集[C];2018年
10 李子超;姜东伯;杨舒雅;王静;孙元杰;赵国庆;杨琨;;B细胞受体相关蛋白31对胶质瘤细胞行为的影响[A];第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2016年
相关重要报纸文章 前2条
1 特约记者 李岳冰;中国胶质瘤放疗专家共识发布[N];健康报;2018年
2 张献怀 张文;瘤区埋雷 持续杀伤[N];健康报;2007年
相关博士学位论文 前10条
1 程志华;“分子海绵”长链非编码RNA XIST通过i调控胶质瘤成瘤及血管新生的机制研究[D];吉林大学;2019年
2 董博奇;颅内免疫胶质瘤裂解物联合鞭毛蛋白诱导的抗小鼠脑胶质瘤效应[D];吉林大学;2019年
3 朱丹化;MicroRNA-497通过靶向调控mTOR及Bcl-2增强胶质瘤对替莫唑胺的耐药性[D];苏州大学;2018年
4 肖瑾;多模态MRI在人脑胶质瘤病理分级、基因型及其预后评估中的应用[D];安徽医科大学;2018年
5 尤昕;Nexilin表达下调对胶质瘤细胞生物学特性的影响及机制研究[D];延边大学;2015年
6 邓鑫;HAX-1蛋白通过Akt1通路对胶质瘤细胞增殖和调亡的影响及机制研究[D];郑州大学;2018年
7 唐纯海;miR-130a调控靶基因HMGB2抑制胶质瘤增殖和EMT的分子机制研究[D];南方医科大学;2018年
8 孙瑾;MiR-152-3p靶向调控DNMT1-NF2通路与胶质瘤细胞凋亡、侵袭机制的研究[D];南方医科大学;2018年
9 卢凤飞;miR-497/Wnt3a/c-jun反馈环路调控神经胶质瘤细胞生长和上皮—间质转化的分子机制研究[D];南方医科大学;2018年
10 李峰;阻断CD47-SIRPα信号通路对胶质瘤细胞/胶质瘤干细胞的靶向治疗研究[D];南方医科大学;2018年
相关硕士学位论文 前10条
1 周洲;敲减长链非编码RNA CRNDE促进miR-136表达并抑制胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭[D];江苏大学;2019年
2 张德龙;LncRNA ASB16-AS1对胶质瘤生物学行为的影响[D];皖南医学院;2019年
3 刘俊;lncRNA BLACAT1及miR204-5p在胶质瘤中的表达及预后的相关研究[D];皖南医学院;2019年
4 周黄贵;长链非编码RNA BLACAT1对胶质瘤增殖、侵袭、迁移的影响[D];皖南医学院;2019年
5 鄢腾峰;MiR-512-5p靶向JAG1抑制胶质瘤细胞增殖并诱导细胞周期阻滞[D];南昌大学;2019年
6 肖冬玲;多模态磁共振成像在胶质瘤术前分级及与Ki-67、Survivin表达的相关性研究[D];西南医科大学;2016年
7 杨亚丽;长链非编码RNA LINC00461调控胶质瘤细胞的增殖和迁移[D];武汉大学;2017年
8 郭彩丽;IKBKE通过激活AKT/NF-KB信号通路调控胶质瘤的生长过程及增强胶质瘤的抗药性[D];郑州大学;2019年
9 张仁;lncRNA ENST00000413528作用于miR-593-5p通过调控PLK1对胶质瘤细胞增殖、侵袭和调亡的影响[D];郑州大学;2019年
10 曾凡涛;IDH1R132H突变与胶质瘤相关性癫痫患者术后痫性再发的关系[D];郑州大学;2019年
，
本文编号：
2654143
