雷帕霉素与TAT-apoptin协同抗神经胶质瘤细胞成瘤性的研究

发布时间：2017-03-26 01:16

  本文关键词：雷帕霉素与TAT-apoptin协同抗神经胶质瘤细胞成瘤性的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：神经胶质瘤是颅内发病率最高的恶性肿瘤,侵袭性强,中位生存期通常不足一年。研究表明,mTOR信号通路的异常活化与胶质瘤、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤的发生有关,因此以mTOR为靶点治疗肿瘤成为研究新热点。雷帕霉素(rapamycin.Rapa)是一种从吸水性链霉菌发酵液中提取的mTOR抑制剂,具有抗肿瘤的作用。凋亡素(apoptin)是鸡贫血病毒中的VP3蛋白质。由于其能够特异性诱导肿瘤细胞凋亡,对正常细胞无任何毒副作用,可以成为一种理想的抗肿瘤靶向药物。凋亡素通过抑制热休克蛋白70(Hsp70)的表达,切断Hsp70对肿瘤细胞的保护作用,引起肿瘤细胞凋亡。本文通过体外与体内实验研究雷帕霉素与TAT-apoptin联合应用对胶质瘤的影响,探讨联合应用是否比单独用药效果好。联合与单独用药后,使用MTT检测U87胶质瘤细胞的增殖率,AO/EB荧光染色检测凋亡形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率；在裸鼠C6胶质瘤皮下移植模型中进行单独及联合用药,探讨单独用药及联合用药的效果。结果显示,雷帕霉素与TAT-apoptin单独用药均能抑制U87细胞的增殖,且随着药物浓度的增加细胞增殖率逐渐降低；在联合用药与单独用药对比实验中,联合用药组细胞增殖率明显低于单独用药组。联合用药组细胞核染呈橘红色,为晚期凋亡状态,凋亡率明显高于两种药物单独使用。动物实验中Rapa组抑瘤率为29.49%,TAT-apoptin组为24.11%,联合用药组为65.5%,联合组抑瘤率比单独组高。因此,Rapa与TAT-apoptin联合用药可增强对胶质瘤细胞增殖的抑制作用,促进胶质瘤细胞的凋亡,产生协同的抗肿瘤作用。
【关键词】：雷帕霉素 凋亡素 神经胶质瘤 抗肿瘤药物联合治疗
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 绪论12-26
• 1.1 胶质瘤的分子靶向治疗12-16
• 1.1.1 胶质瘤的研究进展12
• 1.1.2 分子靶向治疗的研究概况12-16
• 1.2 mTOR信号通路及雷帕霉素16-21
• 1.2.1 mTOR的分子结构与功能16-17
• 1.2.2 mTOR信号转导通路及调节17-18
• 1.2.3 其它信号通路与mTOR的相互作用18-19
• 1.2.4 mTOR信号通路抑制剂的研究进展19-20
• 1.2.5 雷帕霉素及其衍生物20-21
• 1.3 凋亡素及热休克蛋白7021-25
• 1.3.1 细胞凋亡与肿瘤21
• 1.3.2 凋亡素诱导肿瘤凋亡的研究进展21-23
• 1.3.3 热休克蛋白70与凋亡素的关系23-24
• 1.3.4 热休克蛋白70与mTOR的关系24-25
• 1.4 小结25-26
• 第二章 雷帕霉素与TAT-apoptin在体外对胶质瘤的影响26-42
• 2.1 材料与仪器26-32
• 2.1.1 主要材料26-27
• 2.1.2 实验仪器27-28
• 2.1.3 主要试剂的配制方法28-32
• 2.2 实验原理32-34
• 2.2.1 镍柱亲和层析32-33
• 2.2.2 凝胶过滤层析33
• 2.2.3 MTT实验原理33
• 2.2.4 细胞凋亡检测原理33-34
• 2.3 实验方法34-42
• 2.3.1 TAT-apoptin的分离纯化34-37
• 2.3.2 细胞复苏、传代、冻存及运输37-38
• 2.3.3 细胞计数38-39
• 2.3.4 体外细胞相对活性检测39-40
• 2.3.5 AO/EB双染检测40
• 2.3.6 流式细胞仪检测40-42
• 第三章 雷帕霉素与TAT-apoptin对胶质瘤在体内成瘤的影响42-44
• 3.1 材料及试剂42
• 3.1.1 实验材料及仪器42
• 3.1.2 主要试剂的配制42
• 3.2 C6胶质瘤细胞的培养42-43
• 3.3 建立裸鼠皮下C6胶质瘤模型43-44
• 第四章 实验结果44-52
• 4.1 TAT-apoptin的表达及纯化44-45
• 4.2 体外细胞活性检测45-47
• 4.3 AO/EB荧光染色检测结果47
• 4.4 流式细胞仪检测结果47-48
• 4.5 裸鼠皮下移植瘤实验48-52
• 第五章 讨论52-55
• 第六章 总结与展望55-57
• 6.1 总结55-56
• 6.2 展望56-57
• 致谢57-58
• 参考文献58-67
• 附录A 攻读硕士学位期间发表论文67-68
• 附录B68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 杨群英;陈忠平;;恶性胶质瘤分子靶向药物联合治疗新动态[J];中国神经肿瘤杂志;2007年04期

  本文关键词：雷帕霉素与TAT-apoptin协同抗神经胶质瘤细胞成瘤性的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：268065