黄体酮促进脑出血后轴突再生及相关机制研究

发布时间：2020-05-26 23:13

【摘要】：目的观察黄体酮对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后大脑基底节区神经元轴突再生的影响,探讨其具体的机制。方法1.将大鼠分为脑出血组、黄体酮小剂量组(8mg/kg)、黄体酮大剂量组(16mg/kg),假手术组为对照组。观察各组术后1、3、7、14d神经功能缺损、脑组织含水量、病理变化。2.分析术后3d各组脑血肿体积、氧化应激相关指标及凋亡相关指标。3.Western blot观察各组术后1、3、7、14d轴突生长相关蛋白表达变化。同时运用免疫组化、免疫荧光检测术后3天轴突生长相关蛋白表达变化。4.联用大剂量黄体酮和PI3K/Akt通路抑制剂LY294002作为抑制剂组,检测术后3d各组轴突相关蛋白及通路蛋白P-Akt、RhoA表达量的变化。5.采用双标荧光对GAP43、p-Akt/RhoA进行定位,验证轴突生长蛋白GAP43与通路蛋白间的关系。结果1.黄体酮能够明显改善大鼠脑出血后的神经功能障碍并减轻脑水肿程度。其中,3d时各组大鼠神经功能缺陷最重、脑组织含水量最高。HE染色显示黄体酮可在各时间点改善脑出血后脑组织损伤。2.脑出血组脑血肿体积最大,氧化应激产物水平及凋亡相关表达增高最明显,黄体酮干预后在各时间点损伤情况缓解,大剂量组比小剂量组的效果更明显。3.Western blot、免疫组化及免疫荧光结果显示,黄体酮大剂量组比黄体酮小剂量组和脑出血组GAP43、NF200表达增加,MAG、Nogo-A表达降低。4.Western blot检测结果显示抑制剂组与黄体酮大、小剂量组相比,GAP43、NF200 及 P-Akt 表达下调,MAG、Nogo-A、RhoA 表达量增高。5.双标荧光结果示各蛋白表达于同种细胞上,且黄体酮大剂量组与脑出血组比较,神经元细胞上P-Akt表达上升,RhoA表达降低。结论黄体酮可改善脑出血后神经功能障碍,促进损伤轴突的再生修复,该机制可能与激活PI3K/Akt通路从而抑制RhoA表达有关。
【图文】：

先增后降的趋势，在术后３ｄ时ｍＮＳＳ评分和脑组织含水量值最高。与脑出血组相逡逑比，小剂量组和大剂量组的ｍＮＳＳ评分和脑组织含水量显著降低ＣＰ＜０．０５），且大逡逑剂量组ｍＮＳＳ评分和脑组织含水量显著低于小剂量组（尸＜０．０５，图１）。该结果提逡逑示黄体酮能减轻脑出血后的脑水肿程度，保护神经功能，且大剂量黄体酮的上述作逡逑用优于小剂量黄体酮。逡逑Ｚ］逦！逦＝假手术组逦Ｊ：］逦ｆ逦Ｄ假手术组逡逑Ｊ邋＇邋ｆ逦ａｂ逦■妹出血姐逦５逦ｆ邋ａｂ逦｜ｂ逦｜逦ａ逦■？脑出血组逡逑Ｓ１２－邋Ｌｂ逦Ａａｂｃ逦ａ逦ｅａ’】、剂录组逦ｉ？ｌ邋ｌｉａｂｃ逦ｉｌｂｃ逦ｌａｂ逦Ｉ逦叫、剂量组逡逑５邋９邋ＩＩ逦＼ｉ＼逦｜ａｂ邋ａ逦大剂魏逦＾邋８０＇邋ＩＪ邋Ｊ．逦０逦ｌｌｌ＾ｂｃ逦ｌ＾ｂ逡逑ｉｉｉｌｔｌ邋ｉｌｌｌｌｉｒ逡逑１ｄ邋３ｄ邋７ｄ邋１４ｄ邋Ａ逦１ｄ邋３ｄ邋７ｄ邋１４ｄ邋Ｂ逡逑图１各组大鼠神经功能评分和脑组织含水量的比较逡逑Ｆｉｇ邋１邋Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｆｕｎｃｔｉｏｎ邋ｓｃｏｒｅｓ邋ａｎｄ邋ｂｒａｉｎ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｗａｔｅｒ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ逡逑２．２黄体酮干预后脑出血周围组织的病理学变化逡逑ＨＥ染色观察同样证实黄体酮可以减轻脑出血周围损伤脑组织的水肿程度：假逡逑手术组大鼠脑组织具有正常的组织形态，细胞间隙正常，神经细胞呈现有序的排列，逡逑胞核形状均匀规则，脑出血组血肿周边受损脑组织可见明显的水肿，神经细胞排列逡逑１７逡逑

逑杂乱，胞体皱缩，细胞核固缩。小剂量组和大剂量组受损脑组织形态改变基本如同逡逑脑出血组，但周边组织水肿较轻，大剂量组水肿程度最轻（图２）。逡逑１ｄ逦３ｄ逦７ｄ逦１４ｄ逡逑１：逦，５逡逑■■■■邋■■■■邋■■■■逡逑．．逡逑轫＊邋■邋：■邋■－逡逑＊邋ｉ．．－．，：？邋■逦－逦■邋，，；逦．－■：逡逑＾邋■．邋．邋．．：．二，．．邋．．逡逑珀邋Ｉ、．逡逑，＞邋ｖ邋＇■，邋／逡逑．．邋■邋？邋？邋？邋—邋．邋？逡逑图２各组大鼠脑出血后的病理学改变（ＨＥ邋ｘ４００）逡逑Ｆｉｇ邋２邋Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋ｃｅｒｅｂｒａｌ邋ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ邋ｏｆ邋ｒａｔｓ邋（ＨＥ邋ｘ邋４００）逡逑２．３黄体酮干预后脑血肿体积及氧化应激指标的改变逡逑术后３ｄ的脑血肿体积大剂量组最低，脑出血组最高，组间差异有统计学意义逡逑（Ｐ＜０．０５
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743.34

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本文编号：2682549