Lnc00665影响脑胶质瘤细胞增殖与迁移的机制研究

发布时间：2020-05-28 13:53

【摘要】：近年研究表明,LncRNA通过对.miRNA、蛋白等物质的调节来影响不同信号通路,在生命活动中起着重要作用。同时,其表达异常对肿瘤的发生和预后都有着至关重要的作用。目前,在已发表的文章中,未发现Lnc00665的相关报道,因此本文对Lnc00665的功能进行研究。课题组前期发现在脑胶质瘤细胞中,Lnc00665过表达可促进细胞增殖、迁移与侵袭能力。为了对此功能进行进一步确认,本论文将从Lnc00665表达下调的角度,进一步研究Lnc00665对细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。我们利用RNAi技术,对脑胶质瘤细胞中Lnc00665不同位点进行干扰,使Lnc00665表达下调并构建稳转细胞系。通过MTT增殖曲线实验及克隆形成实验发现,当Lnc00665表达下调时,胶质瘤细胞增殖速度显著降低;通过细胞周期、Annexin V/PI双染实验和Caspase 3/7活性分析发现,Lnc00665表达下调后,细胞周期时相被阻滞到G1期,而且细胞凋亡显著增加;通过q RT-PCR发现,与细胞增殖相关的C-myc表达量在RNA水平显著降低。进一步利用Transwell小室进行迁移、侵袭实验发现,当Lnc00665表达下调时,胶质瘤细胞迁移侵袭能力明显下降;与迁移侵袭相关的Tenascin-C表达量显著降低。由此证明Lnc00665表达下调后抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力。为了研究Lnc00665的调控机制,利用生物信息学分析发现,mi R-1224-5p可能直接与Lnc00665相互作用。利用荧光素酶双报告系统实验,证实Lnc00665为miRNA-1224-5p的直接作用靶标。为了进一步研究miRNA-1224-5p对脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,我们将miRNA-1224-5p mimic转染到胶质瘤U251细胞中,通过MTT增殖曲线和克隆形成分析发现,当miRNA-1224-5p过表达后,U251细胞增殖能力明显降低;利用细胞周期分析发现,miRNA-1224-5p过表达后细胞周期时相被阻滞到G1期;同时,应用Annexin V/PI双染实验与Caspase 3/7的活性分析发现,当miRNA-1224-5p过表达后,细胞凋亡的数量显著增加,而且Lnc00665的过表达可以明显回复miRNA-1224-5p对胶质瘤细胞诱导凋亡的效应;通过q RT-PCR发现,miRNA-1224-5p过表达后,C-myc表达水平明显降低。进一步利用Transwell小室实验发现,当miRNA-1224-5p过表达后,胶质瘤细胞迁移和侵袭能力明显下降,Tenascin-C表达量显著降低。由此证明miRNA-1224-5p表达上调后抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力。上述实验结果证明miRNA-1224-5p通过调控Lnc00665的表达来抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力。本研究为脑胶质瘤诊断和治疗提供一定的线索。
【图文】：

路线图,路线,读数,生物信息学

摇床上裂解 15min，期间对细胞进行吹打，保证细胞裂解完全；④将细胞裂解液转移至 1.5mL EP 管中，12000 r/min 离心 2min，将上清转移至新的 EP 管中，置于冰上；⑤打开机器，设置好程序后，在新的 EP 管中加入 50μL LARⅡ，加入 10μL 细胞裂解液，吹打 2-3 次，放入机器中进行读数；⑥第一次读数结束后，迅速拿出 EP 管，加入 50μL Stop&Glo reagent，吹打 2-3次，放入机器中再次读数，记录两次读数的值。2.4 生物信息学预测网站及分析软件（1）基因分析软件：DNAman、primer premier 5、MEGA6；（2）生物信息学预测软件：GeneFriend；（3）图像分析软件：GraphPad Prism 5、Photoshop CS6Image Studio、2.5 实验技术路线

脑胶质瘤细胞,脑胶质瘤,病毒感染,细胞系

00665 在脑胶质瘤组织及正常脑组织中瘤组织中表达水平高于正常脑组织表达调对脑胶质瘤细胞增殖的影病毒感染 U87 细胞的效率脑胶质瘤细胞生长、黏附依赖、迁源性高表达的细胞系作为实验材胞系 U87、U251 进行实时定量中可以看出（图 3-2），Lnc00665的表达量，因此我们选择 U87 细
【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.4

【参考文献】