MLPA在杜氏肌营养不良产前诊断中的应用研究

发布时间：2020-05-30 20:41

【摘要】：目的:杜氏肌营养不良(Ducherme muscular dystrophy,DMD)是由肌营养不良蛋白(dystrophin)基因突变所致的一种伴X染色体连锁的隐性遗传病,是一种最严重的、致死性神经肌肉疾病,目前尚无有效的治疗方法。因此,在对DMD患者及携带者行基因诊断,以及高风险胎儿行产前诊断,都显得尤为重要。本研究采用多重连接依赖性探针扩增技术(MLPA),对DMD家系进行基因诊断和产前诊断,探讨MLPA在产前诊断中的应用价值。方法:收集广西医科大学第一附属医院产前诊断与遗传病诊断科就诊的3个DMD家系(共10例),采集患儿及其母亲的外周血,以及妊娠18-22周的羊水,提取DNA,运用MLPA技术检测DMD致病基因表达情况,同时行羊水细胞染色体核型分析产前诊断。结果:3个DMD家系中,家系I先证者属于DMD外显子49-50纯合缺失,家系I母亲属于DMD外显子49-50杂合缺失;家系II先证者1与2均属于DMD外显子45-47纯合缺失,家系II母亲属于DMD外显子45-47杂合缺失;家系III先证者属于DMD外显子45-52纯合缺失,家系III母亲属于DMD外显子45-52杂合缺失。产前诊断结果显示:三个家系胎儿染色体核型分析正常,家系I胎儿为男性,DMD外显子拷贝数均正常,为正常胎儿;家系II胎儿为男性,DMD外显子45-47纯合缺失,为男性患儿;家系III胎儿为女性,DMD外显子拷贝数均正常,为正常胎儿;根据遗传咨询,家系I、III胎儿均正常,可继续妊娠,家系II胎儿为男性患者,告知父母胎儿患病风险,其父母商量后决定终止妊娠。结论:MLPA技术是一种能针对待测核酸靶序列进行定性及定量分析的新型技术,能一次性对DMD所有外显子进行重复和缺失突变的筛查。采用这一技术,使得DMD家系的基因诊断和产前诊断,更为便捷、可信。
【图文】：

示意图,技术原理,示意图,探针

图 2-1 MLPA 技术原理示意图Figure 2-1 the technical principle of MLPAMLPA 试剂盒 (SALSA MLPA PROBEMIX P034-A3/P035-A3)购自荷兰MRC-Holland 公司，，包含 80 对不同的探针，被分为两类：P034 和 P035，P034-A3 探针盒包含了检测 DMD 基因外显子 1~10，21~30，41~50，61~7探针，P035-A3 探针盒包含了检测 DMD 基因外显子 11~20，31~40，51~6070~79 探针，另有一个探针用于代替外显子 1DP427c。实验操作步骤按照试剂盒说明书严格进行。（1）变性、杂交：稀释 50-200ngDNA 样本溶于 5μl 洗脱缓冲液 TE 中在 98℃变性 5min，然后待冷却至 25℃，再加入杂交混合液（P034-A3/P035-A3 探针混合物和 MLPAbuffer），混匀，95℃，1min，60℃，16h；

染色体核型分析,羊水,家系,外显子

XY IIT 46，XY IIIT 46，XX图 3-1 羊水染色体核型分析Figure 3-1 karyotype analysis of amniotic fluid3.1.2.MLPA 峰图分析在图中，横坐标表示基因的长度，纵坐标表示信号荧光强度。根据峰信号的高低来推断 DMD 基因是重复突变还是缺失突变。如果某个片段无峰信号则表示纯合缺失，低于正常峰值则表示杂合缺失，高于正常峰值则表示重复。家系 I 先证者属于DMD外显子49-50纯合缺失，家系I母亲属于DMD外显子 49-50 杂合缺失，家系 I 胎儿为男性，未检测出 DMD 外显子重复或缺失，如图 3-2；家系 II 先证者 1 与 2 均属于 DMD 外显子 45-47 纯合缺失，家系 II 母亲属于 DMD 外显子 45-47 杂合缺失，家系 II 胎儿为男性，检测
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R746.2

【参考文献】