S100β基因修饰的嗅鞘细胞与ANX共培养后修复周围神经缺损的研究

发布时间：2020-06-07 02:53

【摘要】：目的探讨S100β基因感染的嗅鞘细胞(OECs)与脱细胞异种神经桥接体(ANX)共培养后对大鼠坐骨神经损伤的修复效果。方法1.使用差速贴壁联合胰酶限时消化法培养SD乳鼠嗅球来源的OECs,用表达S100β基因的慢病毒感染OECs并检测感染细胞的增殖情况。2.用化学萃取法对新西兰大白兔来源的胫神经支架进行脱细胞处理并检测脱细胞效果。3.建立完全离断8mm的SD大鼠坐骨神经缺损模型,分别使用单纯ANX、复合了空载体感染的OECs的ANX和复合了S100β感染的OECs的ANX桥接大鼠缺损的坐骨神经两断端即ANX组(A组)、GFP-OECs+ANX组(B组)和S100β-OECs+ANX组(C组),并在4w、8w两个时间点上对修复周围神经缺损的效果进行评价。结果1.使用差速贴壁联合限时胰酶消化法获得的OECs纯度为(96.13±0.01)%。2.经化学萃取法获得的ANX完全去除了细胞、髓鞘等结构,仅保留了基膜成分。3.术后4w,与A、B组相比,C组坐骨神经功能指数等行为学及胫骨前肌湿重比率上的恢复更好(P0.05),在组织学上,B、C组桥接体内部多为细胞结构但A组多为血管结构;8w时,C组坐骨神经功能指数、爬坡坡度、患肢回缩时间、潜伏期、传导速度多项指标均优于A、B组且有统计学差异(P0.05),胫骨前肌湿重比率、腓肠肌湿重比率优于A、B组且仅与A组有统计学差异(P0.05),A、B组间比较,B组各项指标在数值上均优于A组但仅在坐骨神经功能指数、患肢回缩时间及腓肠肌湿重比率几项指标上具有统计学差异(P0.05),在组织学上,与A组相比,B、C两组的再生髓鞘形态更为规则。结论本实验通过使用S100β慢病毒感染OECs的方法获得S100β过表达细胞体系,且该细胞体系与ANX之间有良好的相容性;两者共培养之后可以分泌NGF、BDNF等促进神经再生的因子。本研究结果证实负载了S100β-OECs的ANX可以作为大鼠坐骨神经的损伤与修复实验的理想材料且其修复效果良好。
【图文】：

A：原代培养 24h 的 OECs 形态，B：移植前的 OECs 形态。BCs 的鉴定及纯度计算光显微镜下观察细胞鉴定后的荧光图片(见图 2)，图 2A 是 OECs 的细胞质，由 FITC 染成绿色，2B 是 DAPI 标记的所有，呈蓝色，图 2C 是图 2A 和图 2B 叠加后的彩色图片，，两者重叠为染的细胞核应为杂质细胞，从细胞鉴定的免疫荧光图片中随机进行 p75 标记的阳性细胞及细胞总数的计数，进而计算 OECs度=某一视野 p75NGF 标记的阳性细胞数/DAPI 标记的细胞总统计 结果见表 1，该方法培养 的第三代 OECs 的纯 度可 达，可以满足实验的移植需要。

545266504927156 54 69 51 52 282 s 的慢病毒感染 MOI=10 的慢病毒感染 P1 代 OECs，24h 后弃含病毒的培培养基 48h 后在倒置荧光显微镜下观察细胞的形态及感染现 P1 代 OECs 大部分成双极性生长(见图 3A、3C)，大部光(见图 3B、3D)且两组细胞间的荧光强度相差不大，说明染效果在空载体感染组和 S100β感染组间无明显差异。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R745

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本文编号：2700723