急性脑梗死患者P2Y12和CYP2C19基因多态性对氯吡格雷抗血小板作用的影响

发布时间：2020-06-10 13:30

【摘要】：目的:为给急性脑梗死患者个体化治疗提供更多的参考和依据,本课题选取血小板活化标志物CD62P、PAC-1及NIHSS评分作为主要评价指标,分析不同P2Y12和CYP2C19基因型患者应用氯吡格雷后的指标差异,探讨急性脑梗死患者P2Y12和CYP2C19基因多态性对氯吡格雷抗血小板作用及临床疗效的影响。方法:1.根据病例入选及排除标准选取商丘市第一人民医院神经内科2016年12月至2017年11月之间收治的急性脑梗死患者111例作为研究对象。2.采用PCR-RFLP法对纳入本研究的111例急性脑梗死患者进行P2Y12和CYP2C19基因多态性检测。根据P2Y12基因上G52T位点是否存在突变将入选患者分为G52T突变组和G52T非突变组,根据CYP2C19基因分型情况将入选患者分为快代谢组(CYP2C19*1/*1,EM组),中代谢组(CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3,IM组),慢代谢组(CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3和CYP2C19*3/*3,PM组)。3.利用流式细胞术检测入选患者应用氯吡格雷治疗前、治疗第7天和治疗第14天血小板活化标志物CD62P、PAC-1的阳性表达率,以阳性表达率表示其表达水平。4.利用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)对入选患者应用氯吡格雷治疗前、治疗第7天和治疗第14天的神经功能缺损程度进行评分,评估各组急性脑梗死患者应用氯吡格雷的临床治疗效果。5.采用SPSS 20.0软件进行统计分析,比较各组患者治疗前后血小板活化标志物CD62P、PAC-1表达水平及NIHSS评分的组内差异和组间差异,评价急性脑梗死患者P2Y12和CYP2C19基因多态性与氯吡格雷抗血小板作用及临床疗效的相关性。结果:1.入选本研究的111例急性脑梗死患者中,G52T突变组患者36例,占比32.4%,G52T非突变组患者75例,占比67.6%;快代谢组患者42例,占比37.8%,中代谢组患者53例,占比47.7%,慢代谢组患者16例,占比14.5%。2.应用氯吡格雷治疗前,各组急性脑梗死患者血小板活化标志物CD62P、PAC-1表达水平及NIHSS评分比较均无显著差异(P0.05)。与应用氯吡格雷治疗前相比,应用氯吡格雷治疗第7天和治疗第14天,G52T突变组、G52T非突变组、快代谢组和中代谢组血小板CD62P、PAC-1表达水平及NIHSS评分均显著减少(P0.05),慢代谢组血小板CD62P、PAC-1表达水平虽然有降低趋势,但无显著差异(P0.05)。3.应用氯吡格雷治疗第7天、治疗第14天,G52T突变组与G52T非突变组的血小板CD62P、PAC-1表达水平及NIHSS评分比较均无显著差异(P0.05);慢代谢组和中代谢组血小板CD62P、PAC-1表达水平均显著高于快代谢组,差异具有统计学意义(P0.05);慢代谢组的NIHSS评分均显著高于快代谢组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.急性脑梗死患者CYP2C19基因多态性与氯吡格雷的抗血小板作用和临床疗效密切相关,同等用药情况下快代谢组患者应用氯吡格雷后的抗血小板作用和临床疗效最好,中代谢组次之,慢代谢组患者相对较差,可根据患者CYP2C19基因型合理选择氯吡格雷的使用。2.急性脑梗死患者P2Y12基因G52T位点多态性可能与氯吡格雷抗血小板作用无明显相关性。
【图文】：

图 2.1 P2Y12 基因 PCR 反应程序设置2.2 酶切反应P2Y12 基因 G52T 位点 PCR 产物的酶切反应体系如表 2.3 所示，将混匀后置于 58℃恒温水浴中酶切 4 h。表 2.3 P2Y12 基因 G52T 位点 PCR 产物酶切反应体系（30 μL）2.3 酶切产物电泳将酶切产物置于 3.0%的琼脂糖凝胶中进行电泳，，具体操作如下：1）用 10 μL 微量移液枪分别吸取 9 μL 的酶切产物和 1 μL 的 Load试剂 剂量PCR产物 15.0 μLBSAJ I内切酶 1.5 μLCutSmart Buffer(10×) 3.0 μLddH2O 10.5 μL

⑤72℃终末延伸 5 min⑥4℃保存程序设置见图 2.1。经反复优化后选择降落 PCR 技术对 CYP2C19 基因外显子 5 片段进行特异性扩增，反应条件为：①95℃高温预变性 5 min②94℃变性 30 s③58℃-50℃退火 30 s ×9（每个循环下降 1℃）④72℃延伸 30 s⑤95℃变性 30 s⑥50℃退火 30 s ×26⑦72℃延伸 30 s⑧72℃终末延伸 5 min⑨ 4℃保存程序设置见如图 2.2 所示。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743.3

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本文编号：2706358