Cys-C、miRNA-155及miRNA-21在无症状性脑梗死患者中的表达与诊断价值分析

发布时间：2020-06-10 18:46

【摘要】：背景与目的无症状性脑梗死(asymptomatic cerebral infarction,ACI)是脑梗死(cerebral infarction,CI)中的一种特殊类型。ACI是指临床上无任何脑梗死病史、缺乏特异性神经系统症状和体征而由尸检或影像学检查发现的脑梗死。虽然ACI患者仅表现为一过性或短暂的头晕、头痛或情绪低落,但已证实ACI患者发生症状性脑梗死(symptomatic cerebral infraction,SCI)、血管性痴呆(vascular dementia,VD)的概率显著高于健康人群。多数学者认为,ACI是SCI与VD的前期阶段。因此,尽早发现、诊治ACI是预防缺血性脑部病变的关键。近年来,随着CT、MRI的应用,ACI在人群中的检出率,尤其在老年人群中的检出率逐年升高,但由于影像学检查费用较高且有潜在的辐射、基层地区设备缺乏,因此仍急需新的生物标志物用于鉴别诊断ACI,从而积极预防缺血性脑部病变。胱抑素C(cystatin-c,Cys-C)是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂。Cys-C在人体有核细胞中始终稳定表达,不受性别、年龄、饮食、代谢影响,临床上常通过检测Cys-C值用来反映肾小球滤过率。近年来,不断有研究发现,血清Cys-C水平与颅内外动脉狭窄、脑梗死及脑梗死后认知执行功能密切相关。国外学者提出,Cys-C可以作为脑梗死的一项独立危险因素。MicroRNA(miRNA)是一类内源性单链非编码RNA,其长度约为21-24个核苷酸,通过直接降解靶mRNA或抑制其转录后翻译从而调控基因的表达。MiR-155作为一种经典多功能基因,一直都受到广泛的关注。以往研究表明,miR-155在脑梗死患者中表达水平高于健康人群。此外,miR-155的含量与神经缺损程度呈正相关。临床实验表明,miR-21不仅与脑胶质瘤密切相关,而且在CI患者中呈高表达状态。综上所述,Cys-C、miR-155、miR-21与CI存在一定相关性,但在ACI患者中具体表达情况尚未清楚,目前仍然缺乏诊断ACI的生物标记物。因此,本研究通过检测健康人群、ACI患者及SCI患者中Cys-C、miR-155、miR-21的表达水平,评估它们作为诊断ACI患者的临床价值。方法1.研究对象:分别选取郑州大学第一附属医院神经内科确诊的ACI患者80例、SCI患者80例作为ACI组、SCI组。同期收集与患者性别、年龄相匹配的健康体检者50例作为健康对照(healthy control,HC)组。2.标本收集及检测:抽取外周静脉血4ml于黄色分离胶促凝管,离心分离血清后立即于Roche cobas 8000仪器上检测Cys-C浓度。抽取外周静脉血4ml于枸橼酸钠抗凝管,离心分离血浆,采用RNAiso Blood试剂(Takara公司,货号:9112,日本)提取血浆总RNA。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测各标本miR-155、miR-21的表达水平。3.统计分析:使用SPSS 20.0及GraphPad Prism 5.0分别对三组Cys-C、miR-155、miR-21的表达情况进行数据分析,编辑受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,根据ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)、敏感度、特异度来评价Cys-C、miR-155、miR-21单独或联合对鉴别诊断ACI患者的临床价值。4.靶基因预测:选用TargetScan、miRDB、mirBase靶基因预测软件分别对miR-155、miR-21进行靶基因预测,并应用DAVID 6.7在线分析库进行GO分析和KEGG通路富集分析。结果1.ACI组与HC组相比,Cys-C、miR-155、miR-21表达水平升高(1.11±0.21vs.0.866±0.19,P0.001;0.085±0.047 vs.0.033±0.013,P0.001;0.071±0.022vs.0.045±0.018,P0.001);SCI组与ACI组相比,Cys-C、miR-155、miR-21表达水平升高(1.42±0.26 vs.1.11±0.21,P0.001;0.183±0.098 vs.0.085±0.047,P0.001;0.103±0.032 vs.0.071±0.022,P0.001)。结果显示,ACI组Cys-C、miR-155、miR-21表达水平与HC组、SCI组比较有明显差异(P0.001)。2.Cys-C鉴别ACI组与HC组、SCI组的AUC分别为0.798、0.833,灵敏度分别为73.75%、80.00%,特异度分别为76.00%、73.75%。结果显示,Cys-C对鉴别ACI患者与健康人群、SCI患者具有一定临床价值。3.MiR-155鉴别ACI组与HC组、SCI组的AUC分别为0.880、0.821,灵敏度分别为75.00%、70.00%,特异度分别为85.42%、90.00%。结果显示,miR-155对鉴别ACI患者与健康人群、SCI患者具有一定临床价值。4.MiR-21鉴别ACI组与HC组、SCI组的AUC分别为0.810、0.785,灵敏度分别为64.20%、78.75%,特异度分别为92.00%、72.84%。结果显示,miR-21对鉴别ACI患者与健康人群、SCI患者具有一定临床价值。5.Cys-C联合miR-155鉴别ACI组与HC组、SCI组的AUC分别是0.915、0.835,灵敏度分别是96.25%、80.00%,特异度分别是78.00%、73.85%。Cys-C联合miR-21鉴别ACI组与HC组、SCI组的AUC分别是0.897、0.870,灵敏度分别是97.50%、71.25%,特异度分别是76.00%、96.25%。miR-155联合miR-21鉴别ACI组与HC组、SCI组的AUC分别是0.881、0.953,灵敏度分别是63.75%、100.00%,特异度分别是94.00%、87.50%。Cys-C、miR-155联合miR-21鉴别ACI组与HC组、SCI组的AUC分别是0.913、0.869,灵敏度分别是95.00%、86.25%,特异度分别是78.00%、78.57%。结果显示,Cys-C联合miR-155在诊断ACI患者和健康人群中的效果优于单个指标及其他联合指标,对鉴别ACI和健康人群具有较高临床价值。miR-155联合miR-21在诊断ACI患者和SCI患者中的效果优于单个指标及其他联合指标,对预测ACI发展为SCI具有较高临床价值。6.DAVID 6.7生物学分析结果显示:miR-155预测靶基因的功能包括细胞凋亡、后脑发育、血管生成等生物学过程;富集通路包括MAPK信号通路、TNF信号通路等。miR-21预测靶基因的功能包括血管重塑、神经元凋亡、神经胶质细胞迁移等生物学过程;富集通路包括MAPK信号通路、TGF-β信号通路、Ras信号通路等。结论1.Cys-C联合miR-155在诊断ACI患者和健康人群中的效果优于单个指标及其他联合指标,对鉴别ACI和健康人群具有较高临床价值。2.MiR-155联合miR-21在诊断ACI患者和SCI患者中的效果优于单个指标及其他联合指标,对预测ACI发展为SCI具有较高临床价值。
【图文】：

表达水平,纯度,浓度

图 1 Cys-C 在 HC 和 ACI 与 SCI 组中的表达水平RNA 的浓度及纯度检测NA 的 OD 260/280 值在 1.8-2.0 之间，，纯度符合要

表达水平

miR-155在HC和ACI与SCI组中的表达水平
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743.3

【相似文献】