腺相关病毒介导神经肽Y过表达参与神经病理性疼痛研究

发布时间：2020-06-18 00:49

【摘要】：目的:探索时间序列下神经病理性疼痛大鼠模型中的关键差异表达基因;探究腺相关病毒工具在该类疼痛中过表达神经肽Y等关键基因效应,研究其对痛阈改善效应。方法:1.分析神经病理性疼痛造模后不同时点大鼠基因芯片,获得关键基因,分析关键基因表达聚类及相关功能,构建蛋白互作网络;在其他数据集中检验关键基因表达差异。2.成年SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分4组。前三组分别脊髓内注射转载神经肽Y过表达基因工具腺相关病毒、阴性对照病毒及生理盐水,后均选择性结扎坐骨神经;空白对照假手术组仅切开后缝合。所有动物行特定时点BBB评分(Basso Beattie Bresnahan Score)及机械痛阈测定,测定完成后取L5段脊髓,免疫组化测定神经肽Y表达。结果:共筛检出神经肽Y等738个时间序列下关键差异表达基因;采用腺相关病毒工具实现神经肽Y在腺相关病毒组大鼠的过表达,14d后仍能检测到神经肽Y免疫活性;所获神经肽Y过表达大鼠机械痛阈升高(P0.05)。结论:1.神经肽Y等700余个基因是神经病理性疼痛不同时点下的关键调控基因;2.腺相关病毒介导下,神经肽Y在大鼠脊髓组织中过表达可持续至造模后14日;3.腺相关病毒介导的神经肽Y在大鼠脊髓组织中的过表达与大鼠行为学和机械痛阈的改善具有一定相关性。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R741
【图文】：

目的基因序列为在人和大鼠间共保守表达（最终表达产物氨基PY（NM_000905），采用载体为 GV388，元件顺序 CMVbGlLAG-WPRE-hGHpolyA，该载体含有一个增强型绿色荧光标记Fluorescent Protein; GFP）。克隆位点为 BamHI / BamHI。实验的图谱见图 2-1。为保证实验的可比性，采用 CON336 病毒为。 目 的 基 因 片 段 引 物 共 两 段 ， TAGTGGAATGGATCCCGCCACCATGCTAGGTAACAAGCGACCATGGTGGCGGGATCCCACATTGCAGGGTCTTCAAGC-产包装过程包括将上述该目的片段克隆入重组质粒，AAV-293，观察出毒、纯化与病毒滴度质量控制。实验所用腺相关病毒化学技术有限公司包装；最终测得实验用到待测腺相关病毒病1012。动物饲养与分组图 2-1 腺相关病毒载体图谱

GsE3o691表达量箱线图

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本文编号：2718428