特异性杀伤胶质瘤干细胞化合物SN38的发现及评价

发布时间：2020-06-18 21:28

【摘要】：目的:建立一种高效筛选特异性杀伤胶质瘤干细胞(glioma stem cell,GSC)的药物方法,筛选特异性杀伤胶质瘤干细胞的药物,为促进脑胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)治疗药物发现提供策略。方法:将临床病人的胶质瘤干细胞T387GSC稳定转染绿色荧光蛋白,以荧光读值为指示,建立高通量药物筛选方法;筛选60个肿瘤干细胞凋亡相关信号通路抑制剂,优选强活性药物用D456GSC重复验证化合物的效果并测试其人神经胶质细胞(normal human microglia,NHA)及人小胶质细胞(human microglia,HM)的细胞毒性,考察化合物的选择性,发现SN38对胶质瘤干细胞具有选择性的杀伤作用。采用体内移植瘤模型评价SN38的体内抗肿瘤活性研究,考察其对原位瘤小鼠生存期的影响,并通过脑切片HE染色评价SN38对肿瘤增殖的抑制作用。组织病理学水平检测SN38对GSC的杀伤效果及诱导GSC的凋亡情况。并采用流式细胞术及蛋白印迹技术检测候选化合物诱导细胞凋亡情况,通过诱导敲除的方法验证SN38在GSC中的作用靶点。结果:建立了一种高通量胶质瘤干细胞选择性杀伤药物的筛选方法;发现化合物SN38对胶质瘤干细胞细胞毒性最强。实验证明SN38选择性杀伤胶质瘤干细胞,对各株胶质瘤干细胞IC_(50)均小于10nM。而对正常人神经胶质细胞和人小胶质细胞IC_(50)均大于100nM。动物实验结果证明给予化合物SN38明显延长荷瘤小鼠生存期,肿瘤增长减慢,肿瘤细胞凋亡增加,肿瘤干细胞比例降低。细胞免疫荧光实验证明SN38通过诱导胶质瘤干细胞凋亡,减慢肿瘤干细胞增殖。Western-blot结果显示SN38处理胶质瘤干细胞引起拓扑异构酶I蛋白降解,诱导敲低拓扑异构酶I后,胶质瘤干细胞对SN38敏感性下降。结论:以细胞荧光强度为指示的高通量筛选方法能够高效准确地筛选抗脑胶质母细胞瘤药物。化合物SN38在胶质瘤干细胞的作用靶点是TOPI,通过促进胶质瘤干细胞凋亡,抑制增殖来发挥抗肿瘤效果。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.41
【图文】：

第 4 章 实验结果第 4 章 实验结果选结果荧光细胞构建DH-GFP 载体慢病毒包装后，收病毒感染 T387GSC 三天处理细胞，将细胞按照绿色荧光强度进行分选后在激光 波长将发光照射细胞，观察细胞发光情况并拍照。如出明亮的黄绿色荧光。说明细胞稳定表达绿色荧光蛋

化合物高通量筛选结果代表图（40×）

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本文编号：2719858