S100A9促进体外SD大鼠星形胶质细胞凋亡及其机制的实验研究

发布时间：2020-06-20 14:32

【摘要】：本实验以S100A9蛋白和星形胶质细胞为原材料,采用CCK-8法检测不同浓度S100A9对星形胶质细胞的增殖抑制效应以及检测FPS-ZM1、TAK-242对S100A9作用于星形胶质细胞后的保护作用;应用流式细胞术检测细胞凋亡变化;采用ELISA法检测S100A9作用于细胞后上清液中IL-1、IL-6和TNF-α的水平;使用Western blotting检测细胞表达JNK、P38-MAPK、Bcl-2蛋白浓度水平的变化。研究发现,与对照组相比,0.5mg/m LS100A9作用24h后,星形胶质细胞出现显著的增殖抑制效应,且凋亡率显著增高(p0.01)。S100A9+TAK-242组、S100A9+FPS-ZM1+TAK-242组作用24 h后细胞增殖抑制显著降低且凋亡率显著降低(p0.01),S100A9+FPS-ZM1组作用后凋亡率与S100A9组无显著差异(p0.05)。与对照组相比,S100A9单独作用24h后星形胶质细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α显著增加(p0.01),S100A9+FPS-ZM1组、S100A9+TAK-242组、S100A9+FPS-ZM1+TAK-242组,上述因子无明显变化。与对照组相比,S100A9组JNK、P38-MAPK蛋白浓度升高,而Bcl-2蛋白浓度降低;S100A9+TAK-242组、S100A9+FPS-ZM1+TAK-242组JNK、P38-MAPK蛋白浓度均降低,Bcl-2蛋白浓度升高(p0.05);S100A9+FPS-ZM1组3种蛋白浓度变化与S100A9组无明显差异。综上表明,S100A9可能通过上调JNK、P38-MAPK及下调Bcl-2蛋白表达导致细胞凋亡从而抑制其增殖。TLR-4受体的特异性抑制剂TAK-242减轻了S100A9促凋亡作用,表明S100A9可能通过结合星形胶质细胞膜上TLR-4受体促进凋亡作用。S100A9通过结合细胞膜上TLR-4受体和RAGE受体刺激细胞炎性因子产生增多。
【图文】：

<0.01)(图4)。图2GFAP免疫荧光鉴定星形胶质细胞注:A,B,C:GFAP免疫荧光实验组;A:DAPI染核;B:GFAP抗体染胞质;C:AB的组合;D,E,F:PBS对照组;D:DAPI染核;E:PBS染胞质;F:D,E的组合(100滋m)Figure2IdentificationofastrocytesbyGFAPimmunofluorescenceNote:A,B,C:GFAPimmunofluorescenceassaygroup;A:DAPIstaining;B:GFAPantibodiesstainedcytoplasm;C:CombinatorialgraphsofAandB;D,E,F:PBScontrolgroup;D:DAPIstaining;E:PBSstainedcytoplasm;F:CombinatorialgraphsofDandE(100滋m)图3S100A9对星形胶质细胞抑制率的测定注:0,0.1mg/mL,0.5mg/mLS100A9分别作用星形胶质细胞12h,24h,48h;*:p<0.05,**:p<0.01Figure3DeterminationofastrocyteinhibitionratebyS100A9Note:0,0.1mg/mLand0.5mg/mLS100A9actedonastrocytesfor12hours,24hoursand48hoursrespectively;*:p<0.05,**:p<0.01图4FPS-ZM1,TAK-242与S100A9共同作用对星形胶质细胞抑制率测定注:*:对照组与S100A9组相比,#:S100A9垣FPS-ZM1组,S100A9垣TAK-242组,S100A9垣FPS-ZM1垣TAK-242组与S100A9组对比;**:p<0.01,##:p<0.01Figure4DeterminationofastrocyteinhibitionbyFPS-ZM1,TAK-242andS100A9Note:*:OnbehalfofthecontrolgroupcomparedwiththeS100A9group,#:OnbehalfoftheS100A9垣FPS-ZM1group,S100A9垣TAK-242group,S100A9垣FPS-ZM1垣TAK-242group-comparedwiththeS100A9group;**:p<0.01,##:p<0.01图1重组pET28a-S100A9测序峰Figure1RecombinantpET28a-S100A9sequencingpeakmap3654

staining;B:GFAPantibodiesstainedcytoplasm;C:CombinatorialgraphsofAandB;D,E,F:PBScontrolgroup;D:DAPIstaining;E:PBSstainedcytoplasm;F:CombinatorialgraphsofDandE(100滋m)图3S100A9对星形胶质细胞抑制率的测定注:0,0.1mg/mL,0.5mg/mLS100A9分别作用星形胶质细胞12h,24h,48h;*:p<0.05,**:p<0.01Figure3DeterminationofastrocyteinhibitionratebyS100A9Note:0,0.1mg/mLand0.5mg/mLS100A9actedonastrocytesfor12hours,24hoursand48hoursrespectively;*:p<0.05,**:p<0.01图4FPS-ZM1,TAK-242与S100A9共同作用对星形胶质细胞抑制率测定注:*:对照组与S100A9组相比,#:S100A9垣FPS-ZM1组,S100A9垣TAK-242组,S100A9垣FPS-ZM1垣TAK-242组与S100A9组对比;**:p<0.01,##:p<0.01Figure4DeterminationofastrocyteinhibitionbyFPS-ZM1,TAK-242andS100A9Note:*:OnbehalfofthecontrolgroupcomparedwiththeS100A9group,#:OnbehalfoftheS100A9垣FPS-ZM1group,S100A9垣TAK-242group,S100A9垣FPS-ZM1垣TAK-242group-comparedwiththeS100A9group;**:p<0.01,##:p<0.01图1重组pET28a-S100A9测序峰Figure1RecombinantpET28a-S100A9sequencingpeakmap3654

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