恶性脑肿瘤中ACRBP剪接异构体的表达和临床意义分析

发布时间：2020-06-22 16:40

【摘要】：目的:检测和明确肿瘤-睾丸相关抗原ACRBP ORF的选择性剪接区mRNA的存在,检测此剪接异构体在不同类型的恶性脑肿瘤组织中的表达情况,探讨ACRBP的剪接异构体的表达与恶性脑肿瘤类型、ACRBP基因的相关性。方法:(1)临床肿瘤标本收集:2013年-2018年住院并手术的脑肿瘤患者胶质瘤63例(星形细胞瘤33例,胶质母细胞瘤30例),髓母细胞瘤29例。(2)细胞培养:选择实验室稳定传代的细胞株SHG-44(人胶质瘤细胞)、Hep G2(肝癌细胞)、SMMC7721(人肝癌细胞)进行细胞培养。(3)通过选择性剪接相关数据库(Alternative Splicing Database,ASD)对ACRBP基因可能存在的选择性剪接异构体进行预测。针对预测结果,使用Primer Premier 5.0和Oligo 6.0软件设计目标选择性剪接异构体的PCR引物,使用RT-PCR技术检测预测剪接异构体在脑肿瘤样本和细胞株中的表达情况。对表达结果阳性的细胞株样本的PCR扩增产物送公司测序。应用计算机软件对测序结果进行序列的比对分析,经过验证从细胞株样本中提取的mRNA序列与生物信息学预测的序列一致,确定为新的剪接异构体后,对表达结果阳性的脑肿瘤样本采用实时定量PCR反应,检测目标剪接异构体在脑肿瘤组织中的表达情况,分析ACRBP的剪接异构体与临床参数的相关性。结果:(1)TA克隆测序证实了RT-PCR扩增产物为目的基因;(2)成功设计了ACRBP-V5a的特异性引物;(3)从预测的选择性剪接异构体中筛选并证实了一种新型的人类ACRBP基因的剪接异构体——V5a的存在;(4)Hep G2(肝癌细胞),SMMC7721(人肝癌细胞)表达ACRBP-V5a剪接异构体;(5)不同类型的脑肿瘤组织中,该剪接异构体表达阳性率,结果如下:星形细胞瘤30.3%(10/33),胶质母细胞瘤33.3%(10/30),髓母细胞瘤48.3%(14/29),总阳性率37.0%(34/92);在不同类型的脑肿瘤组织中,ACRBP-V5a的表达情况不存在差异(P0.05);(6)在不同性别患者的脑肿瘤组织中,ACRBP-V5a剪接异构体的表达无明显差异(P0.05);在高年龄组与低年龄组患者的脑肿瘤组织中,V5a剪接异构体的表达无明显差异(P0.05);在KPS评分≥70和KPS评分70患者的脑肿瘤组织中,ACRBP-V5a剪接异构体的表达无明显差异(P0.05);高级别与低级别脑肿瘤组织中ACRBP-V5a的表达无明显差异(P0.05);(7)在不同等级和不同类型的ACRBP-V5a阳性脑肿瘤组织中,ACRBP-V5a剪接变体的相对表达水平在年龄、肿瘤分级和肿瘤类型中存在统计学差异(P0.05),而在性别和卡氏功能状态评分标准(KPS)等方面没有统计学差异(P0.05)。结论:ACRBP-V5a为一种新型的选择性剪接异构体,可表达于多种类型的人类脑肿瘤和肝癌中。该剪接异构体的表达与脑肿瘤类型及其发生、发展可能有关。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.41
【图文】：

图 1 ACRBP-V5a PCR 产物电泳图Figure 1ACRBP-V5a PCR products electrophoresisRBPE5-8/ACRBP-V5a 在阳性样本中的相对表达水平星形胶质瘤、胶质母细胞瘤和髓母细胞瘤患者 ACRBP-V5a 阳性，ACRBPE5-8/ACRBP-V5a 相对表达水平（均数±标准差）分别为胞瘤 107.3±160.3、胶质母细胞瘤 50.3±23.0、髓母细胞瘤 3.2±3.2（采用 Mann-Whitney U-检验,对星形细胞瘤、胶质母细胞瘤和髓母细样本，按照肿瘤类型进行两两分类比较，其中星形细胞瘤和胶质之间 ACRBPE5-8/ACRBP-V5a 的表达水平无统计学差异（P>0.05）胞瘤和髓母细胞瘤之间 ACRBPE5-8/ACRBP-V5a 的表达水平有统计（P<0.01）,胶质母细胞瘤和髓母细胞瘤之间 ACRBPE5-8/ACRBP-V

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本文编号：2725946