自发性脑出血中红细胞对AQP-4的影响及其与血脑屏障通透性的关系

发布时间：2017-03-29 17:04

  本文关键词：自发性脑出血中红细胞对AQP-4的影响及其与血脑屏障通透性的关系，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:自发性脑出血(spontaneous intracerebral hemorrhage,SICH)是指在非外伤所致的大脑实质内突然自发性的出血,是临床上致残、致死率很高的神经系统常见的疾病之一。在亚洲国家占脑卒中的20%~30%,但是其死亡率却是最高,而导致脑出血死亡率高的主要原因之一就是脑水肿,自发性脑出血后血肿的不断扩大是导致患者的病情渐恶化的主要原因。SICH后脑水肿的形成机制至今尚未阐明。研究显示,SICH后血肿中的主要成分(本课题拟研究红细胞)与出血后不同阶段脑水肿的形成关系密切,并且水通道蛋白4(AQP-4)在脑组织中水的运转过程中起着重要作用。本课题从红细胞对脑水肿形成和对AQP-4表达影响的角度来研究在SICH中,红细胞与脑水肿形成、AQP-4的表达、血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)通透性之间的关系,以期为SICH后脑水肿防治方面提供实验和理论依据,这是本课题的创新之处,目前国内外尚未见报道。目的:1.阐明SICH中,红细胞对AQP-4表达的影响;2.探讨SICH后脑水肿形成过程中,AQP-4的表达与BBB通透性的关系。方法:本实验动物模型选用健康成年清洁级SD(Sprague Dawley)大鼠共195只,雄性,体重约210~300g,由河南科技大学医学院动物实验中心提供。将SD大鼠随机分为四组;即红细胞(Red blood cell,RBC)组,全血(Whole blood,WB)组、假手术(sham operation,SO))组、正常对照(Normal controls,NC)组。其中RBC组、WB组、SO组按处死时间(6h、1d、3d、5d)再分为四个亚组,每组15只(5只测脑水含量、AQP-4m RNA,5只用于检测水肿区域病理改变和AQP-4阳性细胞分布情况,5只用于检测EB含量)。制作模型:用脑立体定位仪向各组SD大鼠右侧尾状核注入自体WB或RBC以建立SICH模型,并按Bederson方法判断模型是否成功。采集标本,检测脑组织依文思蓝(Evans blue,EB)含量;AQP-4 m RNA变化;脑含水量;HE染色及免疫组化AQP-4的阳性细胞分布情况。结果:1.脑组织EB含量:在RBC、WB、SO、NC组6h、1d、3d、5d的组内比较,其中在RBC组-3d显著高于6h、1d、5d组;组间相比,RBC组-6h时出现升高,第1d时升高明显,3d达到高峰(P0.01),5d时降低但仍高于正常水平(P0.05),WB组与RBC组在各时间点EB含量变化规律相似,但均低于RBC组;SO组与NC组比较无差异(P0.05)。2.脑含水量检测:在RBC组内不同时间点相比,其第3d时结果提示显著比6h、1d、5d组高(P0.01);组间相比,RBC与WB组各时间点间相比,其脑组织水含量变化趋势规律基本相似,但WB组稍低于RBC组。3.RT-PCR检测AQP-4 m RNA表达:RBC组内各时间点相比,RBC组-3d显著高于6h、1d、5d组(P0.01),RBC组-6h后脑组织AQP-4 m RNA表达开始增高,第3d达到高峰(P0.01),之后逐渐下降,在第5d时仍高于正常水平(P0.01);WB组与RBC组AQP-4 m RNA的表达规律基本相似,但低于RBC组。4.免疫组化检测AQP-4表达结果示:RBC组和WB组的3d时都可见AQP-4在神经胶质细胞以及其足突的表达,其胞浆呈棕黄着色。结论:1.脑组织水含量在RBC组和WB组在第3d时最高,提示RBC在SICH后第3d脑水肿的形成中有作用,说明RBC是SICH后脑水肿形成过程中的重要物质基础。2.在RBC组和WB组第3d时AQP-4阳性表达最强,提示RBC可引起AQP-4的表达。3.BBB通透性在RBC组和WB组的通透率最高,而且从6h时开始出现升高,第3d达到高峰,说明SICH后RBC影响BBB通透性。4.综合AQP-4表达、脑水含量、EB检测的结果,AQP-4的阳性表达与脑含水量、BBB通透性的变化一致,即RBC组和WB组第3d时脑含水量和EB含量最高,同时AQP-4的阳性表达最强。说明三者的变化趋势一致,提示SICH第3d脑水肿的加重与BBB通透性的增加和AQP-4的阳性表达增强关系密切。
【关键词】：自发性脑出血 红细胞 脑水肿 血脑屏障 水通道蛋白-4
【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.34
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 绪论11-29
• 1.1 研究背景11-28
• 1.1.1 脑出血的研究现状11-12
• 1.1.2 SICH后血脑屏障的改变12-16
• 1.1.3 SICH后脑水肿的形成16-21
• 1.1.4 SICH后脑水肿过程中红细胞的作用21-22
• 1.1.5 SICH后脑水肿过程中水通道蛋白-4（AQP-4）的进展研究22-25
• 1.1.6 总结与展望25-28
• 1.2 研究目的28
• 1.3 研究意义28-29
• 第2章 材料与方法29-38
• 2.1 材料来源和主要设备29-30
• 2.1.1 主要实验试剂29
• 2.1.2 主要实验设备29-30
• 2.1.3 动物分组30
• 2.2 实验方法30-32
• 2.2.1 麻醉30
• 2.2.2 全血标本的制备30-31
• 2.2.3 红细胞标本的制备31
• 2.2.4 自发性脑出血动物模型的制作31
• 2.2.5 神经功能缺损评分（neurological deficit score NDS））方法31-32
• 2.2.6 标本采集32
• 2.3 检测方法32-37
• 2.3.1 血脑屏障通透性的检测32-33
• 2.3.2 脑含水量的检测33
• 2.3.3 大鼠脑组织切片的制备33
• 2.3.4 病理切片HE染色步骤33-34
• 2.3.5 免疫组化检测AQP-4 的表达34-35
• 2.3.6 AQP-4mRNA的检测35-37
• 2.4 统计学方法37-38
• 第3章 结果38-50
• 3.1 实验动物情况38
• 3.2 病理学检测38-40
• 3.2.1 肉眼观察38-39
• 3.2.2 HE染色光镜观察39-40
• 3.3 免疫组化检测AQP-4 蛋白40-42
• 3.4 脑组织EB含量的变化42-44
• 3.4.1 EB标准曲线42
• 3.4.2 各组 6h时EB含量变化42-43
• 3.4.3 各组 1d时EB含量变化43
• 3.4.4 各组 3d时EB含量变化43
• 3.4.5 各组 5d时EB含量变化43-44
• 3.4.6 各组内不同时间点脑组织EB含量的比较44
• 3.5 AQP-4 mRNA的表达44-47
• 3.5.1 各组 6h时AQP-4 mRNA的表达44-45
• 3.5.2 各组 1d时AQP-4 mRNA的表达45
• 3.5.3 各组 3d时AQP-4 mRNA的表达45-46
• 3.5.4 各组 5d时AQP-4 mRNA的表达46
• 3.5.5 各组内不同时间点AQP-4 m RNA表达的比较46-47
• 3.6 脑组织含水量的变化47-50
• 3.6.1 各组 6h时脑含水量的变化47
• 3.6.2 各组 1d时脑含水量的变化47-48
• 3.6.3 各组 3d时脑含水量的变化48
• 3.6.4 各组 5d时脑含水量的变化48-49
• 3.6.5 各组内不同时间点脑含水量的比较49-50
• 第4章 讨论50-56
• 4.1 动物模型50-51
• 4.2 SICH后脑水肿形成过程中红细胞的作用51-52
• 4.3 SICH后脑水肿过程中与BBB通透性的关系52-54
• 4.4 SICH后脑水肿形成过程中AQP-4 的作用54
• 4.5 结语54-56
• 第5章 结论56-57
• 参考文献57-66
• 缩略语词汇表66-67
• 附录 附图67-69
• 致谢69-70
• 攻读学位期间的研究成果70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 武士京,陈世uo;血脑屏障——解剖与生理[J];现代神经疾病杂志;2003年02期

  本文关键词：自发性脑出血中红细胞对AQP-4的影响及其与血脑屏障通透性的关系，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：274957