ENT1调控大鼠脑缺血再灌注后脑组织中腺苷A1受体表达的研究

发布时间：2020-07-13 07:53

【摘要】：目的:探讨予ENT1(平衡型核苷转运体-1)特异性抑制剂NBTI(硝基苯硫嘌呤核苷)预处理后,脑缺血再灌注(IR)大鼠的神经功能评分及脑组织中腺苷A1受体的表达情况。方法:运用单侧大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立大鼠脑组织缺血再灌注模型,我们将成年雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、MCAO模型组(脑组织缺血再灌注后3 h、6 h、12 h、24 h、72 h)、NBTI组、DMSO(二甲基亚砜溶剂对照)组,其中每组n=10。造模成功后,通过平衡木实验及运动机能测试对实验鼠神经功能缺损进行评估;HE染色观察病理改变;Western Bloting和免疫组化检测腺苷A1受体在不同组别大鼠脑组织海马中的表达。结果:1.神经功能缺损评估:1.1平衡木实验评估结果:我们将平衡木实验中评分为2-4分者纳入正式实验。除正常及假手术组,MCAO模型组及NBTI组、DMSO组均有不同程度的神经功能缺损,且与正常组相比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。其中将予NBTI预处理后的脑缺血再灌注后24 h的实验鼠行平衡木实验后,我们可以发现NBTI组神经功能缺损评分明显低于IR 24h组(图1)(P0.05)。1.2运动机能测试结果:在运动机能测试中较低的倾斜角度表明脑缺血再灌注损伤更严重。与正常组及假手术组相比较,MCAO模型组及NBTI组、DMSO组运动机能均较前者下降(P0.05)。其中NBTI组运动机能测试中倾斜角角度明显高于MCAO后24h组(图2)(P0.05)。2.HE染色结果:本部分实验选择正常组、IR 24h组及NBTI组大鼠脑组织标本进行HE染色,我们发现:正常组大鼠海马神经细胞结构整齐、细胞分布繁密,层次分明,而在IR 24h组中见脑组织神经细胞间隙增大、水肿,甚至存在神经细胞坏死,细胞分布及结构紊乱,核固缩;NBTI组也可见坏死的神经细胞,程度较IR 24h减轻。3.Western Blot和免疫组化检测腺苷A1受体在不同组别大鼠脑组织海马中的表达3.1 Western Blot结果:各组均可见腺苷A1受体的表达;在MCAO模型组中,IR 3h组中腺苷A1受体的表达较正常组及假手术组减少(P0.05),随着时间的延伸,腺苷A1受体表达渐减少,但在IR 12h组中腺苷A1受体的表达上升,在IR 72h组中腺苷A1受体的表达水平接近基础水平(P0.05)(图3)。在NBTI预处理后IR 24h组中腺苷A1受体仍有表达,且高于IR 24h组、低于正常组(均为P0.05)。DMSO组中腺苷A1受体的表达较IR 24h组无明显差异。3.2免疫组化技术检测正常组、IR 24h组及NBTI组中腺苷A1受体的表达情况:实验鼠海马中腺苷A1受体阳性染色的细胞主要为神经细胞(图5);另外,在IR 24h组中腺苷A1受体表达阳性细胞数较正常组明显减少,细胞染色变淡;与IR 24h组相比,NBTI组腺苷A1受体表达增多,但与正常组相比,阳性细胞数数目仍有减少。结论:对IR大鼠予以ENT1特异性抑制剂NBTI预处理后,大鼠神经功能得到改善,可能机制是抑制ENT1后可以增加腺苷A1受体的表达。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R743.3
【图文】：

平衡木,运动机能,神经功能缺损

图 1 大鼠脑缺血再灌注后不同组别的平衡木实验评分Fig.1 Balance group experimental scores of different groia reperfusion in ratshere was statistical significance in the difference of Balance group experimentad with the model group 24h after IR（#P ＜ 0.05)，*Compared with the Normal or Sha大鼠脑组织缺血再灌注不同组别（时间点）运动机能在对不同组别的 SD 大鼠进行平衡木实验完成神经功能缺损评 NBTI 预处理的实验鼠其神经功能损害有所降低，因为平衡木，故为进一步验证，我们采用运动机能测试间接反应实验鼠

倾斜角,硕士学位论文,角度

硕士学位论文大鼠脑缺血再灌注后不同组别的机能测试中倾斜角角度（ x±S） tilt angle of different groups in the functional tests after ceS）oups n The tilt angle of digroups(degree)10 80.6±3.85tion 10 79.8±4.9710 35.6±4.88*10 53.0±6.32*#10 33.6±3.3*ed with the IR 24h group(#P ＜ 0.05)；*Compared with the Normal or Sham opera

腺苷A1受体,灰度值,腺苷,受体

大鼠脑缺血再灌注后不同组别、正常组及假手术组中腺苷 A1 受体灰度值e gray value ratio (adenosine A1 receptor/β-actin）of IR rats in difbasic expression of adenosine A1 receptor was found in the brain tissueation groups. The expression of adenosine A1 receptor in IR 3h group was lowd sham-operated groups in IR mice (P ＜ 0.05). With the extension of time, adeno gradually, but the expression of adenosine A1 receptor increased in brain t group, adenosine A1 receptor the level of body expression was close to the b no significant difference between normal group and sham operation group n of adenosine A1 in brain tissue of IR 3h, IR 6h and IR 12h IR 24h groups wan that of the normal and sham operation groups (P ＜ 0.05), but also signific of IR 72h group (P ＜ 0.05).

【参考文献】