高表达NQO1对左旋多巴异动症的影响及其机制研究

发布时间：2017-03-29 22:10

  本文关键词：高表达NQO1对左旋多巴异动症的影响及其机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究高表达醌氧化还原酶1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase-1, NQ01)对左旋多巴异动症(Levodopa-induced dyskinesia, LID)的影响,从而进一步探究异动症的发病机制和其预防策略。方法：对已有的NQO1转基因小鼠进行繁育,运用PCR技术对子代NQ01转基因小鼠进行基因型的鉴定和筛选,通过免疫组化法比较NQO1转基因小鼠和野生型小鼠脑组织NQO1的表达情况。借助脑立体定位仪,在小鼠脑单侧纹状体区域注射6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA),构建小鼠的帕金森病模型；通过趴壁实验、安非他明诱导转圈实验检测帕金森病小鼠的行为学特征；运用免疫组化观察帕金森病小鼠脑黑质致密部(Substantia nigra compact part, SNpc)多巴胺细胞的损伤程度。在此基础上,筛选模型鼠中行为学数据相近的小鼠,给小鼠腹腔注射左旋多(L-dihydroxyphenylalanine, L-DOPA)和盐酸苄丝肼(Benserazide hydrochioride),建立小鼠异动症模型；再次通过趴壁实验来观察帕金森病小鼠给药L-DOPA后特征性症状的改善情况；根据异常不自主运动(Abnormal involuntary movements, AIM)评分来比较NQO1转基因小鼠和野生型小鼠异动症的严重程度；运用免疫组化分别观察小鼠中脑多巴胺(Dopamine, DA)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)神经元的损伤情况。结果：经过繁育鉴定共获得98只小鼠,其中NQO1转基因小鼠脑组织中的NQO1表达量明显高于野生型小鼠。6-OHDA造模后,实验组小鼠安非他明诱导的转圈数明显高于假手术组,实验组小鼠左前肢的使用情况显著低于假手术组。免疫组化结果显示,实验组小鼠黑质多巴胺细胞损伤明显。行为学和组织学结果证明实验成功构建了6-OHDA损毁一侧黑质的帕金森病小鼠模型。腹腔给药左旋多巴21天后,相比生理盐水组,给药组小鼠的左前肢使用率增加,显示出左旋多巴的治疗效应。但随着给药剂量加倍,实验组小鼠异动症现象明显,对比野生型(WT)、较高表达NQO1转基因小鼠(Tg68)、高表达NQO1转基因小鼠(Tg27)发现：Tg68 NQO1转基因小鼠与野生型小鼠的AIM评分相比有降低趋势,但无统计学差异；Tg27 NQO1转基因小鼠AIM评分明显低于野生型小鼠。免疫组化结果显示,Tg27 NQO1转基因小鼠黑质中损伤侧存活的多巴胺细胞数目多于野生型小鼠。在导水管周围灰质的5-HT细胞上,各组小鼠间未发现明显差异结论：通过在脑内纹状体区域注射6-OHDA,成功构建了小鼠的帕金森病模型。NQO1表达量高的Tg27 NQO1转基因小鼠异动症的程度较低,其黑质中损伤侧存活的多巴胺细胞数目较多,提示高表达NQO1具有抗异动症的效应。但实验结果并未显示异动症与5-HT神经元具有相关性。
【关键词】：NQO1 L-DOPA 异动症 DA神经元 5-HT神经元
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742.5
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 第一章 NQO1转基因小鼠的筛选及帕金森病模型的构建12-31
• 前言12-14
• 1 材料和方法14-23
• 1.1 实验材料14-17
• 1.2 实验方法17-23
• 2 结果23-30
• 2.1 NQO1转基因小鼠的鉴定23-25
• 2.2 NQO1转基因小鼠脑组织中NQO1表达的免疫组化25
• 2.3 小鼠帕金森病模型的构建25-26
• 2.4 小鼠的趴壁实验26-27
• 2.5 安非他明诱导的转圈实验27
• 2.6 帕金森病小鼠的TH免疫组化27-30
• 3 小结和讨论30-31
• 第二章 NQO1转基因小鼠对L-DOPA异动症的影响31-49
• 前言31-32
• 1 材料和方法32-36
• 1.1 实验材料32-33
• 1.2 实验方法33-36
• 2 结果36-46
• 2.1 小鼠帕金森病模型的筛选及实验分组36-37
• 2.2 小鼠的趴壁实验37-38
• 2.3 小鼠的AIM行为学38-41
• 2.4 异动症小鼠的TH免疫组化41-43
• 2.5 异动症小鼠的5-HT免疫组化43-46
• 3 小结和讨论46-49
• 第三章 综述49-55
• 1 异动症及其机制的研究进展49-52
• 1.1 突触前机制49-50
• 1.2 突触后机制50-52
• 2 多巴醌、多巴胺醌及醌蛋白的神经毒性52-53
• 3 异动症的醌-醌蛋白机制53
• 4 醌氧化还原酶1对醌的还原作用53-55
• 参考文献55-64
• 附录64-65
• 致谢65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 周星佑;杨卉;蒋敏海;;5羟色胺系统参与帕金森病异动症的研究进展[J];浙江临床医学;2015年12期

2 杨谦谦;孙芳玲;艾厚喜;张丽;蒋莹;王文;;6-羟基多巴胺诱导帕金森病动物模型及其研究进展[J];中国康复理论与实践;2013年11期

3 王艳;王娜;俞国华;袁崇刚;;NAD(P)H:醌氧化还原酶1对多巴胺能细胞的保护作用[J];中国病理生理杂志;2011年10期

4 弓凯;范存刚;张庆俊;;左旋多巴诱发异动症的相关机制[J];国际神经病学神经外科学杂志;2010年05期

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6 夏小俊,金中初;NQO1酶及其被氧环境诱导表达的研究进展[J];生理科学进展;2002年03期

  本文关键词：高表达NQO1对左旋多巴异动症的影响及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：275523