Epsin3通过诱导EMT过程促进胶质瘤细胞迁移和侵袭

发布时间：2020-07-18 06:42

【摘要】：目的:目前的研究显示,Epsin 3(EPN3)表达主要局限于胃壁细胞、受伤或病变的组织中,而正常的脑组织中不表达EPN3。EPN3已被确定作为癌基因参与雌激素受体阳性的乳腺癌和非小细胞肺癌中,但对其在癌症中具体的功能知之甚少。本研究目的是探讨EPN3在胶质瘤组织中的表达与临床病理特征的关系,以及初步探讨EPN3在胶质瘤细胞恶性行为中的作用及分子机制。方法:从临床上选取167例不同级别的人胶质瘤组织,按照WHO分级,I级+II级为低级别胶质瘤,III级+IV级为高级别胶质瘤。采用免疫组化的检测方法,检测167例不同级别的人胶质瘤组织中EPN3蛋白的表达量。再采用细胞体外培养的方法,选取U87和U251胶质瘤细胞系,通过脂质体转染来敲低和过表达EPN3,进而研究EPN3对胶质瘤细胞的生物学作用,并采用实时定量PCR和Western blotting实验来验证各分子的表达情况。Transwell迁移和侵袭实验来研究EPN3对胶质瘤细胞的迁移和侵袭作用。结果:免疫组化结果显示,96例低级别胶质瘤组织(WHO分级I+II)中,有17例(17.7%)EPN3蛋白表达呈阳性;在71例高级别胶质瘤组织中(WHOⅢ+Ⅳ),有37例(52.1%)EPN3蛋白水平表达呈阳性。在低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组之间,EPN3阳性表达结果之间有明显的统计学差异(P0.001)。但患者的年龄、性别和肿瘤大小与EPN3之间无显著差异性(P0.05)。在胶质瘤细胞系中过表达EPN3激活了转录因子Slug和Twist,并通过诱导胶质瘤细胞上皮 间质转化(EMT)过程促进细胞迁移和侵袭。同时,过表达EPN3增加了NICD1,β-catenin的表达水平。结论:EPN3在胶质瘤中发挥肿瘤促进子的作用,并且通过激活转录因子Slug和Twist而非Snail 1来诱导胶质瘤细胞EMT过程,从而促进胶质瘤细胞发生迁移和侵袭。EPN3诱导胶质瘤细胞发生EMT过程可能与Notch1和β-catenin信号通路有关。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.4
【图文】：

对这 167 例胶质瘤组织进行分析，如图 1-1 所示，图（A）最左侧为结肠癌组织阳性对照，中间的为胶质瘤组织 EPN3 阳性结果，右侧的为胶质瘤组织 EPN3 阴性结果。结果显示，96 例低级别胶质瘤组织中，有 17 例 EPN3 表达为阳性（17.7%）；71 例高级别胶质瘤组织中，有 37 例 EPN3 表达结果为阳性（52.1%）（表 1）（图 1）。低级别胶质瘤组织和高级别胶质瘤组织中 EPN3 阳性率相比，EPN3 在两组之间的表达水平有明显的统计学意义（P＜0.001，表 1）。在 167 例胶质瘤样本中， 小于 45 岁的患者有 90 例，其中 EPN3 表达阳性者有 28 例（31.1%）， 年龄大于等于 45 岁的患者有 77 例，EPN3 表达阳性者有 26 例（33.8%），两者之间没有统计学意义（P>0.05，表 1)。肿瘤组织小于 4.5cm 的121 例患者中，EPN3 阳性者有 39 例（32.2%），肿瘤组织大于等于 4.5cm 的 46例患者中，EPN3 阳性者占 15 例（32.6%），两组之间也没有统计学意义（P>0.05，表 1）。A

天津医科大学硕士学位论文 Epsin3通过诱导EMT过程促进胶质瘤细胞迁移和侵袭1.2.3 EPN3 在胶质瘤细胞系中的表达水平接着，我们采用 Western blotting 的方法对 6 个胶质瘤细胞系（A172，SNB19，LN229，U251，LN308 和 U87）进行 EPN3 蛋白表达的测定。如图 1-1 (B)，在不同的胶质瘤细胞系中，EPN3 的表达水平各不相同。其中 U251 胶质瘤细胞中EPN3 表达水平最高，A172 胶质瘤细胞中表达水平最低。B

图 1-1 （C）通过脂质体将质粒 sh-EPN3-4 和 pCMV6-EPN3 转染到 U87 和U251 胶质瘤细胞中，分别用来敲低和过表达 EPN3 水平，scrambled 和empty 分别作为阴性对照。Western blotting 以及实时定量 PCR 等方法分别用来检测 EPN3 mRNA 的表达水平以及蛋白表达情况。* P＜0.05，P**＜0.01，P***＜0.001。所有实验重复至少三次。 过表达 EPN3 促进 U87 和 U251 胶质瘤细胞侵袭和迁移免疫组织化学结果显示，EPN3 在高级别胶质瘤组织中表达明显增高，由们推测，是否 EPN3 促进胶质瘤组织恶性生物学行为的发生？为了进一步EPN3 在胶质瘤细胞中发挥的作用，我们采用了 Transwell 小室（上室未铺方法来检测 EPN3 对胶质瘤细胞迁移的影响，Transwell 小室（上室铺胶）来检测 EPN3 对胶质瘤细胞侵袭能力的影响。结果如图 2 所示，与对照组比，下调 EPN3 的表达显著抑制胶质瘤细胞株 U87 和 U251 细胞的迁移和力（P＜0.01，图 2A），而上调 EPN3 则明显促进胶质瘤细胞株 U87 和 U251

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本文编号：2760556