MicroRNA-375调控RWDD3对胶质瘤细胞增殖及迁移功能的研究

发布时间：2020-07-19 18:05

【摘要】：目的:以各级别脑胶质瘤组织和U251、U87脑胶质瘤细胞株为研究对象,检测RWDD3(RWD domain containing 3)与miR-375(microRNA-375)在脑胶质瘤组织及细胞中的表达及二者的相关性,进而探讨miR-375、RWDD3对脑胶质瘤生物学行为的作用,为脑胶质瘤的诊断及防治提供新的思路。方法:1.研究RWDD3在脑胶质瘤中的表达及其对脑胶质瘤生物学作用的影响a.采用Western Blot及Real time PCR技术分别检测各级别脑胶质瘤组织、正常脑组织及U251、U87脑胶质瘤细胞株中RWDD3的蛋白及mRNA表达水平;b.在U251、U87脑胶质瘤细胞株中转染RWDD3-shRNA,采用Western Blot及Real time PCR技术分别检测RWDD3的蛋白及mRNA表达水平;采用CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;采用流式细胞术检测细胞周期的改变及细胞凋亡的变化;2.研究miR-375与RWDD3的相关性及其通过调控RWDD3影响脑胶质瘤生物学作用a.在U251、U87脑胶质瘤细胞株中转染miR-375 mimics,采用Real time PCR技术检测miR-375的表达水平;采用Western Blot及Real time PCR技术分别检测RWDD3的蛋白及mRNA表达水平;采用CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化;采用Transwell实验及细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化;b.在U251、U87脑胶质瘤细胞株中共转染pcDNA3.0/RWDD3及miR-375mimics,采用Western Blot及Real time PCR技术分别检测RWDD3的蛋白及mRNA表达水平;采用CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化;采用Transwell实验及细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化;结果:1.RWDD3在脑胶质瘤中的表达水平及其对脑胶质瘤生物学作用的影响a.RWDD3的蛋白及mRNA表达水平与脑胶质瘤级别呈正相关;脑胶质瘤U251及U87细胞株较人脑胶质细胞株HEB中RWDD3表达增高;b.在脑胶质瘤U251及U87细胞株中转染RWDD3-shRNA后,较空白对照组及阴性对照组,RWDD3蛋白及mRNA水平明显下降;脑胶质瘤细胞增殖及侵袭能力均被明显抑制;凋亡能力则被增强;G0/G1期细胞增多;2.miR-375与RWDD3的相关性及其通过调控RWDD3影响脑胶质瘤生物学作用a.在脑胶质瘤U251及U87细胞株中转染miR-375 mimics后,较空白对照组及阴性对照组,mi R-375表达水平明显上调;RWDD3蛋白及mRNA水平明显下调;脑胶质瘤细胞增殖及迁移能力均被抑制;b.在脑胶质瘤U251及U87细胞株中共转染pcDNA3.0/RWDD3及miR-375mimics后,较空白对照组及阴性对照组,RWDD3蛋白及mRNA水平明显上调,脑胶质瘤细胞增殖及迁移能力均被增强;结论:miR-375可通过调控RWDD3的表达影响胶质瘤细胞的增殖及迁移能力。miR-375及RWDD3可为胶质瘤的分子靶向治疗提供新的思路。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.41
【图文】：

PCR 检测高、低级别胶质瘤及正常脑组织中的 RWe expression level of RWDD3 in gliomas and normal b级别的脑胶质瘤组织和 10 例正常脑组织进3 mRNA 表达水平，结果显示高级别胶质瘤级别胶质瘤组织和正常脑组织（*P < 0.05）lot检测RWDD3在人脑胶质瘤组织样本中

图 1 Real time-PCR 检测高、低级别胶质瘤及正常脑组织中的 RWDD3 的表达水平Fig .1 The expression level of RWDD3 in gliomas and normal brain tissues对 72 例不同级别的脑胶质瘤组织和 10 例正常脑组织进行实时荧光定量PCR 检测 RWDD3 mRNA 表达水平，结果显示高级别胶质瘤组织中 RWDD3 表达水平明显高于低级别胶质瘤组织和正常脑组织（*P < 0.05）3.1.2 Western Blot检测RWDD3在人脑胶质瘤组织样本中蛋白的表达

第 3 章 实验结果级别的脑胶质瘤组织和 10 例正常脑组织进表达水平，结果显示高级别胶质瘤组织中 RW瘤组织和正常脑组织（***P < 0.001）PCR检测RWDD3在脑胶质瘤细胞株中m

【参考文献】

相关期刊论文 前3条

1 范阳华;祝新根;叶敏华;廖长春;肖兵;汲乾坤;郭华;吴雷;;靶向RWDD3基因shRNA慢病毒载体的构建及功能鉴定[J];西安交通大学学报(医学版);2016年01期

2 范阳华;祝新根;吕世刚;吴淼经;柴毅;叶敏华;肖兵;吴雷;;慢病毒介导的RWDD3沉默对人胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的影响[J];中国病理生理杂志;2015年09期

3 范阳华;叶敏华;吴雷;何伟;廖长春;汲乾坤;祝新根;;人脑胶质瘤中RSUME的SUMO化与HIF-1α/VEGF通路的相关性[J];西安交通大学学报(医学版);2015年04期

本文编号：2762768