癫痫发作后海马组织与外周血miR-134动态表达研究

发布时间：2020-07-22 16:27

【摘要】：目的:1.探讨癫痫发作后不同时间点,miR-134表达的动态变化特点。2.探讨mi R-134在癫痫大鼠海马组织和外周血中动态表达趋势是否具有一致性。3.外周血中miR-134表达能否作为生物标志物深入研究。方法:实验采用健康成年wistar雌性大鼠,应用戊四氮62 mg/kg腹腔注射法制备大鼠癫痫模型,生理盐水腹腔注射制备对照组大鼠模型,癫痫组模型均按照Racine分级达到癫痫持续状态。按照实验对照原则和癫痫发作后不同时间点分为11个实验组(对照组、0.5h组、1h组、6h组、12h组、24h组、48h组、72h组、1w组、2w组、4w组),每实验组随机取6只存活鼠进入实验分析。应用眼动脉取血法取各组大鼠外周血5ml冻存,随后立即脊椎脱臼后取双侧海马冻存,应用实时荧光定量PCR技术检测海马组织、血液中mi R-134的表达。运用SPSS 22.0软件对所得各组数据行统计学分析,采用独立样本t检验、独立样本Mann-Whitney U检验、Pearson相关系数分析、Spearman相关系数分析、线性回归显著水平检验。P0.05为差异具有统计学意义。结果:1.miR-134在癫痫发作后数小时内海马组织和外周血中表达量均随时间推移逐渐增加,72h达到表达高峰;随后表达量逐渐减少,均低于对照组表达量。2.海马组织和外周血中miR-134表达量在癫痫发作期显著升高,与对照组相比有显著差异(海马组织P=0.037;外周血P=0.042)。发作间期组海马组织和外周血中miR-134表达量与对照组相比显著降低(海马组织P=0.002;外周血P=0.000)。发作期组海马组织中miR-134表达量比发作间期组显著升高(P=0.001),外周血中miR-134在发作期组表达量比发作间期组表达量显著升高(P=0.001)。发作期各时间节点外周血中miR-134表达量均较对照组显著升高(P0.05);发作间期各时间点外周血中miR-134表达量均较对照组显著降低(P0.05)。3.海马组织和外周血中miR-134表达量在癫痫发作后具有趋势一致性。癫痫发作后6h、12h、24h、48h、72h、1w、2w、4w,海马组织和外周血中miR-134表达量具有相关性(P0.05),72小时组相关性最强(P=0.000,r=0.986)。在以上时间点,外周血中miR-134表达量可以反映出海马组织中miR-134表达量水平。结论:1.癫痫发作后miR-134表达量逐渐增加,72h达高峰,发作间期逐渐低于正常水平。2.海马组织和外周血中miR-134动态表达具有趋势一致性。3.海马组织和外周血中miR-134表达量具有相关性,癫痫发作后72h相关性最强,提示外周血中miR-134可作为痫性放电生物标志物进一步研究。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R742.1
【图文】：

扩增曲线,纯度,癫痫持续状态,基因重复

抢救无效死亡，余所有癫痫模型均一次达到癫痫持续状态。癫痫模型制备成功后，偶可观察到自发 RacineI-III 级发作。3.2 海马组织与外周血中 miR-134 的表达用 Thermo NanoDrop 2000 超微量分光光度计对所得实验样本 RNA 进行纯度和浓度分析，反应 RNA 纯度的指标 OD260/280 值均在 1.9-2.0 之间，提示本实验提取的 RNA 纯度较高。新鲜配置 1.2%普通琼脂糖凝胶电泳，向电泳槽中的1 x MOPS-EDTA Buffer 电泳缓冲液，加入 10ul 样本 RNA，于 7.5V/ml 的电压下电泳，在紫外灯下检查电泳结果，电泳图无杂带，提示 RNA 无降解。Retime-qPCR 提示所得 miR-134 和 U6 溶解曲线峰值单一，表明引物的特异性高，扩增曲线平滑表明目的基因重复性好（图 3.1）。

外周血,表达水平,大鼠,发作期

间期）与对照组相比显著降低(P=0.002)；海马组织中miR-134表达量在发作间期比发作期显著降低（P=0.001）。提示癫痫发作期、发作间期与对照组海马组织中miR-134呈差异性表达，具有统计学意义（表3.3、图3.2所示）。表3.3 海马组织中miR-134相对表达量变化N miR-134表达量 P1 P2 P3对照组 6 1.005 ±0.0480.037 0.002 0.001发作期组 42 3.966 ±5.194发作间期组 18 0.722±0.199注：P1为发作期组与对照组大鼠海马组织miR-134表达量对比统计结果；P2为癫痫大鼠发作间期组与对照组海马组织中miR-134表达量对比统计结果；P3为发作期组与发作间期组大鼠海马组织miR-134表达量对比统计结果。P值均由独立样本T检验得出。

散点图,外周血,相关性分析,线性回归

第 3 章实验结果3.5 外周血与海马组织中 miR-134 相关性分析将对照组和各时间点癫痫大鼠所得数据做成以海马组织 miR-134 相对表达量为 X 轴，外周血 miR-134 相对表达量为 Y 轴做散点图（图 3.4），对 X 和 Y进行 Pearson 秩相关检验，P=0.000（表 3.6），线性回归显著水平检验 r2=0.956接近 1，提示外周血与海马组织中 miR-134 表达量具有明显的正相关一致性。

【参考文献】