血浆microRNA作为早期诊断锰中毒性帕金森综合征生物标志物的研究

发布时间：2020-07-24 05:26

【摘要】：目的:锰可以通过多种途径进入人体并在体内蓄积,产生进行性、持久性的神经毒性作用,称为锰中毒。锰中毒早期为类神经征和自主神经功能障碍,继续进展会出现锥体外系神经损害,其与帕金森病(PD)无论是在临床表现还是在神经病理方面都有着一定的相似性。锰中毒发展到晚期病程迁延且不可逆转。因此发现疾病特异性的早期诊断标志物,获得早期诊断及治疗,具有重大的经济及社会效益。本课题旨在筛选锰中毒性帕金森综合征病人血浆中特异表达的microRNA(miRNA),探索血浆miRNA作为锰中毒性帕金森综合征早期生物标志物的诊断价值。方法:收集锰中毒性帕金森综合征组、轻度锰中毒组、帕金森病组和健康对照组的外周血miRNA进行深度测序并筛选出差异表达的miRNA;再利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证其表达水平。对差异表达的miRNA结合生物信息学分析探讨其功能。结果:通过高通量测序技术平均每个样本测得15182448个Raw Data,经过去除低质量、含有过短和Poly-A的序列后每个样本共得到平均为14459404个clean Data。锰中毒性帕金森综合征组和正常对照组有222个miRNAs表达存在显著差异,轻度锰中毒组与正常对照组有462个miRNAs表达存在显著差异,帕金森病组与正常对照组有204个miRNAs表达存在显著差异(|log_2 FC|1.0,P0.05)。锰中毒性帕金森综合征组与轻度锰中毒组有71个相同的miRNAs显著上调,对其中miR-3120、miR-301b、miR-370、miR-21等被预测并验证调控分子伴侣介导自噬途径中关键蛋白HSP70、HSP40、LAMP-2A的4个miRNA进行后续qRT-PCR验证。结果提示miR-3120、miR-301b、miR-21在轻度锰中毒组较正常对照组表达显著上调,miR-370在两组间表达无差异;miR-3120在轻度锰中毒组较帕金森病组表达显著上调,miR-301b、miR-21、miR-370在两组间表达无差异;以上4种miRNA在锰中毒性帕金森综合征组与轻度锰中毒组组间表达无显著差异;miR-3120、miR-370、miR-21在帕金森病组较正常对照组无显著差异,miR-301b在帕金森病组较正常组显著下调(P0.05)。结论:(1)锰中毒性帕金森综合征与帕金森病有着不同的外周血浆miRNA表达谱;(2)慢性锰暴露可以引起靶向HSP70的miR-3120和miR-301b、LAMP-2A的miR-21表达显著上调,从而导致异常聚集的蛋白转化及降解受损,可能是锰中毒的主要发病机制;(3)miR-3120有望成为鉴别锰中毒性帕金森综合征与原发性帕金森病的早期特异性生物标志物。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R742.5
【图文】：

示意图,文库构建,示意图

miRNA文库构建示意图

帕金森综合征,锰中毒,热图,组间

3-1 各组间显著差异表达 miRNA 聚类热图：（a）锰中毒性帕金森综合征与正常对照组；（毒组与正常对照组；（c）帕金森病组与正常对照组。.3-1 Heat map are shown clustering the differentially expressed miRNAs: miRNAs from plasmnganese-induced Parkinsonism patients（b）mild manganismus patients（c）PD patients wi

帕金森综合征,锰中毒,测序

图 3-2 锰中毒帕金森综合征组 vs 正常组测序结果中显著差异的前 15 个 miRNAFig.3-2 The top fifteen with the most significant difference miRNAs from plasma of manganese-inParkinsonism patients with healthy controls.

【相似文献】