雄激素受体抑制剂（Flutamide）及AR基因沉默对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响

发布时间：2020-07-30 11:10

【摘要】：目的:研究不同浓度的雄激素受体抑制剂(flutamide)对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响。通过建立雄激素受体(Androgen receptor,AR)基因干扰沉默的胶质瘤细胞株,更加深入的探讨AR基因沉默对体内外胶质瘤细胞生物学活性的影响,并为研究雄激素受体信号通路对胶质瘤的诊疗奠定基础。方法:(1)采用不同浓度的flutamide(低浓度1.0×10~(-8)、中浓度1.0×10~(-7)、高浓度1.0×10~-66 mol/L)作用于胶质瘤细胞系U251,Real Time-PCR和Western Blot检测AR mRNA及AR蛋白的表达情况;(2)通过CCK8、细胞凋亡、细胞侵袭实验检测不同浓度的flutamide对胶质瘤细胞增殖、侵袭等生物学活性的影响;(3)采用慢病毒转染U251胶质瘤细胞,并用嘌呤霉素进行不断筛选,建立稳定干扰沉默AR基因的胶质瘤细胞株,并通过Real Time-PCR和Western Blot检测AR mRNA及AR蛋白的表达情况;(4)采用CCK8、细胞凋亡、Transwell侵袭、裸鼠成瘤实验探究AR基因沉默对胶质瘤细胞增殖、侵袭、体外成瘤能力等生物学活性的影响;(5)进一步通过Real Time-PCR、Western Blot实验检测AR沉默的胶质瘤细胞Bax/Bcl2凋亡相关基因mRNA及蛋白表达情况。结果:(1)在体外胶质瘤细胞的增殖、侵袭能力能被AR抑制剂(flutamide)显著抑制且凋亡增加,与药物浓度正相关(P0.05)。(2)通过嘌呤霉素进行不断筛选一周,得到表达GFP(green fluorescent protein)荧光的稳转细胞株。行Real Time-PCR检测显示,与空白对照组和空质粒组相比,U251-AR组AR mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05),空白对照组和空质粒组之间差异无统计学意义(P0.05)。表明已成功建立稳定干扰沉默AR的U251-AR和空质粒胶质瘤细胞株。(3)AR基因干扰沉默的U251-AR组胶质瘤细胞的增殖、侵袭能力显著抑制且凋亡增加;U251-AR组异位移植瘤体积、重量均明显小于空白对照和空质粒组。提示胶质瘤细胞的AR干扰沉默后其成瘤能力明显降低(P0.05)。(4)与空白对照组和空质粒组相比,U251-AR细胞促凋亡基因Bax表达增加,且抑制凋亡基因Bcl2表达减少,差异有统计学意义(P0.05),空白对照组和空质粒组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论:(1)AR抑制剂(flutamide)能明显降低胶质瘤细胞的增殖与侵袭能力,并且诱导细胞凋亡,AR可能是引起胶质瘤发生发展的危险因素。(2)成功建立的AR干扰沉默的胶质瘤细胞株U251-AR,为下一步深入探讨AR基因对体内外胶质瘤细胞生物学活性的影响奠定基础。(3)通过沉默胶质瘤细胞中的AR基因,胶质瘤细胞的增殖侵袭能力降低,细胞凋亡增加,体外成瘤能力明显降低。表明AR在调节体内外胶质瘤细胞生物学活性方面起到关键作用。(4)U251-AR组促凋亡基因Bax表达增加,且抑制凋亡基因Bcl2表达减少,AR可能通过凋亡基因Bax/Bcl2信号通路影响胶质瘤细胞的生物学活性。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.41

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