普朗克127修饰氧化石墨烯载盐酸阿霉素抗人神经胶质瘤的体外实验研究

发布时间：2017-03-30 18:07

  本文关键词：普朗克127修饰氧化石墨烯载盐酸阿霉素抗人神经胶质瘤的体外实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:检测氧化石墨烯(Graphene oxide,GO)及普朗克127修饰的氧化石墨烯(Pluronic F127 modified graphene oxide,PF127-GO)对人星形胶质细胞、人神经胶质瘤细胞是否具有毒性作用。制备PF127-GO-DOX并研究其抗神经胶质瘤作用。为探索治疗胶质瘤的新技术提供思路。方法:实验主要分为分三部分:第一部分研究GO及PF127-GO的毒性作用,此部分应用人星形胶质细胞(AS)和人胶质瘤细胞(U251),采用CCK-8法检测不同浓度的GO及PF127-GO对上述细胞的存活率的影响。实验分组:(1)GO组:5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml;(2)PF127-GO组:5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml;(3)对照组。用不同浓度的GO、PF127-GO分别作用于AS细胞和U251细胞24h、48h、72h,CCK-8法检测细胞存活率,分析GO及PF127-GO对AS细胞和U251细胞的毒性作用。确定纳米材料的安全浓度范围。本部分所用的星形胶质细胞为原代分离培养的人胎脑星形胶质细胞,用GFAP采用免疫荧光法进行鉴定。第二部分制备PF127-GO-DOX并对其进行检测。应用紫外分光光度计检测是否载药成功,绘制DOX标准曲线,计算载药量。此部分实验还制备了FITC-PF127-GO和FITC-PF127-GO-DOX,应用荧光显微镜观察纳米粒子分布情况,观察载药体系是否进入细胞。第三部分研究了PF127-GO-DOX的抗人神经胶质瘤的作用,主要为体外实验。此部分应用人神经胶质瘤U251细胞,采用CCK-8法检测PF127-GO-DOX对U251细胞存活率的影响。此部分实验首先测定了一系列不同浓度的PF127-GO-DOX和DOX对U251细胞的影响,比较两者间的差异,选取合适的浓度进行下一步实验。之后用不同浓度的PG、DOX、PF127-GO-DOX作用于U251细胞,倒置显微镜下观察细胞变化,CCK-8法测定细胞存活率,分析并比较三者之间的关系,评价PF127-GO-DOX抗人神经胶质瘤作用。结果:(1)5μg/ml及以下的PF127-GO及GO对人星型胶质细胞无明显的毒性作用。(2)50μg/ml及以下的PF127-GO及GO对U251细胞无明显的毒性作用(3)成功制备PF127-GO-DOX,载药量为0.83mg/mg,包封率为83%。(4)在DOX剂量相同的情况下,随着PF127-GO-DOX、DOX浓度的增高,细胞存活率下降,两组间无统计学差异。在实验所用浓度范围内,PF127-GO对U251细胞无明显毒性作用。结论:(1)小浓度的GO及PF127-GO对AS及U251细胞无明显毒性作用。(2)成功制备PF127-GO-DOX,载药量为0.83mg/mg,包封率为83%。(3)PF127-GO-DOX对人胶质瘤细胞有较强的杀伤作用。
【关键词】：氧化石墨烯 PF127 盐酸阿霉素 载药 胶质瘤
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 中英文缩略词对照表11-12
• 第1章 引言12-14
• 第2章 文献综述14-19
• 2.1 载药14-16
• 2.2 热疗16-17
• 2.2.1 光热疗法16-17
• 2.2.2 热疗联合化疗17
• 2.3 GO免疫治疗17
• 2.4 小结与展望17-19
• 第3章 GO及PF127-GO的毒性检测19-29
• 3.1 材料19-20
• 3.1.1 主要仪器与设备19
• 3.1.2 主要试剂19-20
• 3.1.3 GO及PF127-GO20
• 3.1.4 细胞20
• 3.2 方法20-23
• 3.2.1 GO及PF127-GO对人星形胶质AS细胞的毒性研究20-22
• 3.2.2 GO及PF127-GO对人神经胶质瘤U251细胞的毒性研究22-23
• 3.2.2.1 U251细胞的复苏、培养与冻存22
• 3.2.2.2 实验分组22
• 3.2.2.3 CCK-8法检测不同浓度GO及PF127-GO对U251的毒性22-23
• 3.2.3 统计学分析23
• 3.3 结果23-27
• 3.3.1 人星形胶质AS细胞鉴定23-24
• 3.3.2 不同浓度GO、PF127-GO作用AS细胞后细胞存活率24-26
• 3.3.3 不同浓度GO、PF127-GO作用U251细胞后细胞存活率26-27
• 3.3.4 不同浓度PF127-GO与GO作用U251细胞后细胞存活率比较27
• 3.4 讨论27-28
• 3.5 结论28-29
• 第4章 PF127-GO-DOX的制备及检测29-36
• 4.1 材料29-30
• 4.1.1 主要仪器与设备29-30
• 4.1.2 主要试剂30
• 4.2 方法30-31
• 4.2.1 PF127-GO-DOX的制备30
• 4.2.2 紫外-可见光分光光度计检测载药情况30-31
• 4.2.3 检测PF127-GO-DOX是否进入人神经胶质瘤细胞31
• 4.3 结果31-34
• 4.3.1 紫外-可见光分光光度计检测PF127-GO-DOX制备成功31-32
• 4.3.2 PF127-GO-DOX载药量测定32-33
• 4.3.3 荧光显微镜检测PF127-GO-DOX分布情况33-34
• 4.4 讨论34-35
• 4.5 结论35-36
• 第5章 PF127-GO-DOX抗人胶质瘤U251的体外实验研究36-43
• 5.1 材料36-37
• 5.1.1 主要仪器与设备36
• 5.1.2 主要试剂36-37
• 5.2 方法37-38
• 5.2.1 CCK-8 法检测细胞存活率37
• 5.2.2 细胞形态学37-38
• 5.2.3 统计学分析38
• 5.3 结果38-41
• 5.3.1 DOX和PF127-GO-DOX作用于U251细胞比较38
• 5.3.2 PF127-GO-DOX、DOX、PF127-GO作用于人神经胶质瘤细胞U251后细胞存活率38-40
• 5.3.3 细胞形态学变化40-41
• 5.4 讨论41-42
• 5.5 结论42-43
• 第6章 结论43-44
• 参考文献44-50
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果50-52
• 致谢52

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本文编号：277733