LPS诱导大脑皮层Ast的活化及对Kir-4.1表达的影响

发布时间：2017-03-30 21:16

  本文关键词：LPS诱导大脑皮层Ast的活化及对Kir-4.1表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本实验通过LPS作用于体外培养的SD大鼠大脑皮层Ast,探索LPS对Ast活化的最佳条件;探讨LPS对Ast的IL-1β分泌和Kir-4.1表达的影响及后两者间可能存在的关系,为预防和治疗癫痫提供新方法。方法:1)取24 h内出生的SD大鼠,打开颅骨取大脑半球皮质区,剥离脑膜和血管获取大脑皮层,用剪刀将其剪碎,用含0.25%的胰蛋白酶进行消化,用含10%的血清培养液吹打终止消化,移至离心管离心后弃上清液,用种植培养基将其制备成单细胞悬液。经过细胞计数并差速贴壁处理后,接种到25cm2培养瓶中,用DMEM/F12培养基原代培养7~10 d。待细胞铺满整个瓶底,纯化18 h后,在超净台内经过消化后进行细胞传代培养。经过3次传代可获得较高纯度的Ast细胞,采用免疫细胞化学法对其进行纯度检测。2)应用MTT法检测LPS对Ast的活化作用:将培养好的细胞分成实验组和对照组,实验组用不同浓度LPS(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)分别处理Ast不同时间(12 h、24 h、36 h、48 h)后,采用MTT法进行细胞活性检测;对照组为同一条件下没有作任何处置的Ast细胞。3)应用ELISA法检测中LPS诱导Ast的IL-1b分泌情况。实验组用LPS(5μg/ml)处理Ast不同时间(12 h、24 h、36 h、48 h)后,采用ELISA法进行细胞分泌情况检测;对照组为同一条件下没有作任何处置的Ast细胞。4)应用RT-PCR技术,检测实验组与对照组中Kir-4.1、IL-1bmRNA的表达情况。结果:1)GFAP免疫细胞化学法鉴定结果显示,GFAP阳性星形胶质细胞较多,纯度可达到95.50%,由此说明培养的细胞可以用于后续的实验。2)LPS对Ast的活化作用:通过MTT实验结果发现,LPS可以诱导体外培养的Ast活化,并且呈浓度和时间依赖性。3)ELISA法检测结果显示:与对照组相比较,LPS(5μg/ml)处理Ast不同时间(12h、24h、36h)后,细胞培养上清中的il-1b水平显著升高。(p0.05)4)经半定量rt-pcr检测结果显示:随着lps处理时间的延长,kir-4.1mrna的表达逐渐下降、而il-1bmrna的表达则逐渐上升。结论:1)使用原代分离培养、纯化传代的方法可获得较高纯度的ast。2)lps可诱导体外培养的ast活化,且当lps浓度为5μg/ml,处理时间为36h时ast呈现最佳激活状态。3)lps诱导活化的ast中,kir4.1mrna表达的变化可能受il-1b的调节。
【关键词】：星形胶质细胞 细胞培养 白介素1 beta 内向整流钾离子通道4.1
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.1
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 材料与方法11-19
• 结果19-25
• 讨论25-28
• 结论28-29
• 参考文献29-34
• 附录A 主要英文缩略词表34-35
• 附录B 常用试剂配制35-37
• 附录C 致谢37-38
• 附录D 综述 脂多糖导致痫性发作及其机制的研究进展38-46
• 参考文献44-46

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 项红兵,田玉科;星形胶质细胞与疼痛敏化调控[J];临床麻醉学杂志;2003年09期

2 刘慧,王小军,胡荣,杨忠,蔡文琴;星形胶质细胞[J];生理科学进展;2004年01期

3 张敬军;;星形胶质细胞的研究[J];中国药理学通报;2006年07期

4 陈彬;刘宽;王伟;;成年大鼠神经元和星形胶质细胞细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子表达的差异研究[J];卒中与神经疾病;2007年05期

5 沈维高;何欣;王振江;;星形胶质细胞的生物学功能及其与疾病的关系研究进展[J];北华大学学报(自然科学版);2008年06期

6 ;英国科学家确定星形胶质细胞新功能[J];中国当代医药;2010年27期

7 靳哲;赵忠新;;星形胶质细胞在癫痫发病中的作用研究[J];世界临床药物;2012年01期

8 李军杰,张致身;短暂性脑缺血发作后海马区星形胶质细胞形态学研究[J];首都医科大学学报;1998年04期

9 解旭东,田国红;星形胶质细胞与癫痫[J];中风与神经疾病杂志;1999年01期

10 莫永炎,姜勇,陈瑗;脑星形胶质细胞生物学功能研究进展[J];生理科学进展;2002年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 刘庆莹;赵珠峰;朱长庚;;星形胶质细胞在癫痫复发中的作用[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

2 唐爱辉;王同飞;王世强;;星形胶质细胞钙活动:脑细胞网络中的第二兴奋系统?[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年

3 池美珠;陈超;钱燕;李剑敏;吴步猛;;产前重复激素治疗对星形胶质细胞发育的影响[A];浙江省围产医学学术会议论文汇编[C];2005年

4 魏尔清;;半胱氨酰白三烯受体对星形胶质细胞功能的调节作用[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年

5 吴建云;王鲜忠;王剑;谌剑波;范光丽;张家骅;;大脑皮质星形胶质细胞培养及鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年

6 赵玉武;程晓娟;;星形胶质细胞与脑水肿的形成[A];山东省2013年神经内科学学术会议暨中国神经免疫大会2013论文汇编[C];2013年

7 董其平;柴真;;谷氨酸对培养的星形胶质细胞的钙活动的影响[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年

8 曾俊;李康生;;柯萨奇病毒感染星形胶质细胞及细胞因子变化研究[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2010年

9 鲍欢;徐晓云;顾晓波;徐霞红;胡晖;;缺氧后水通道蛋白4在体外培养星形胶质细胞表达变化的实验研究[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年

10 熊加祥;白云;宋敏;王艳艳;杨晓亚;;星形胶质细胞表达免疫分子维持大脑免疫稳态[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前7条

1 记者 胡德荣;星形胶质细胞由“天使”变“魔鬼”原因找到[N];健康报;2012年

2 记者 刘海英;星形胶质细胞可调节呼吸强度[N];科技日报;2010年

3 刘霞;脑内星形胶质细胞在实验室培育成功[N];科技日报;2011年

4 汪敏华;大脑星形胶质细胞有两种新功能[N];解放日报;2003年

5 吴一福;黄芪可调节星形胶质细胞“时间模式”[N];中国医药报;2005年

6 南方日报记者 曹斯　实习生 赵莞 张宁 通讯员 邹莹 张淼;用ATP对抗不快乐[N];南方日报;2013年

7 记者 班玮;德国脑细胞再生研究取得新进展[N];人民日报;2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 曾招;离子通道TRPM7调节细胞生理的分子机制研究[D];苏州大学;2014年

2 黄维一;骨髓间充质干细胞旁分泌因子对缺血性脑卒中后星形胶质细胞活性及功能的影响[D];南方医科大学;2015年

3 杨俊华;星形胶质细胞来源的ATP促进丘脑中的突触删除[D];浙江大学;2015年

4 邓雅婷;龙胆苦苷镇痛与抗抑郁的中枢作用及机制研究[D];第四军医大学;2015年

5 李新;星形胶质细胞NDRG2在七氟烷预处理神经保护作用中的机制研究[D];第四军医大学;2015年

6 高蓓;视上核星形胶质细胞对急性腹腔高渗刺激引起的神经元反应的调节及其机制[D];第四军医大学;2008年

7 李学忠;星形胶质细胞在脂多糖诱导的多巴胺神经元损伤中的作用[D];苏州大学;2008年

8 曹旭;1，5-二咖啡酰奎宁酸预处理对星形胶质细胞脑缺血模型的保护作用及机制的研究[D];华中科技大学;2010年

9 黄晓佳;5-脂氧酶和半胱氨酰白三烯受体在大鼠星形胶质细胞缺氧缺糖损伤中的作用[D];浙江大学;2007年

10 王萍;星形胶质细胞与神经元细胞周期调控机制研究[D];华中科技大学;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 龚佩佩;磷酸化MSK1在星形胶质细胞炎症活化过程中的作用的研究[D];南通大学;2013年

2 何洁玉;糖皮质激素对星形胶质细胞分泌GnRH的调控机制[D];西南大学;2015年

3 张丽丽;脂肪基质细胞诱导分化为星形胶质细胞过程中线粒体凋亡与自噬的关系[D];河北联合大学;2014年

4 燕茹;高同型半胱氨酸血症致ApoE~(-/-)小鼠脑血管、星形胶质细胞及神经元损伤作用研究[D];宁夏医科大学;2015年

5 米鹏霞;P物质对星形胶质细胞的活化作用及机制研究[D];山西医科大学;2015年

6 杨志奇;小鼠皮层内移植胶质细胞形态及功能重建研究[D];第三军医大学;2015年

7 陈雅南;敲除星形胶质细胞的dicer对中枢神经系统的影响[D];杭州师范大学;2015年

8 马辉;星形胶质细胞上酸敏感离子通道1a在颞叶癫痫发生中的作用研究[D];第四军医大学;2015年

9 周亚兰;IFN-γ介导T细胞参与炎性痛慢性化机制的研究[D];第二军医大学;2015年

10 邓子辉;瘦素抑制星形胶质细胞缝隙连接蛋白-43表达改善脑缺血再灌注损伤的机制研究[D];中国人民解放军医学院;2015年

  本文关键词：LPS诱导大脑皮层Ast的活化及对Kir-4.1表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：278113