C5L2基因多态性与大动脉粥样硬化型脑梗死的关联性分析

发布时间：2020-08-08 10:58

【摘要】：目的C5L2基因位于19号染色体长臂,由337个氨基酸构成,其中698CT位点突变引起第233位密码子编码的氨基酸由脯氨酸变为亮氨酸,901GT位点突变则引起第300位密码子编码的精氨酸被谷氨酰胺所置换。C5L2是一种G蛋白偶联受体,是促酰化蛋白的功能受体,Asp-C5L2可介导调节葡萄糖的转运及脂质的代谢、储存。另外,C5L2也曾被认为是C5a的哑巴受体,在动脉粥样硬化的晚期阶段,C5L2高表达与高水平的促炎细胞因子直接相关。本研究旨在探讨C5L2基因的SNP位点C698T及G901A的多态性及其与大动脉粥样硬化型脑梗死的相关性。方法本研究采集全血进行DNA的提取、采用PCR-基因片段多态性的方法对254例大动脉粥样硬化型脑梗死患者和228名对照就C698T及G901A两个基因位点进行基因型鉴定。首先于研究对象全血样本中提取DNA样本,然后利用PCR技术实现目的DNA的体外扩增,并根据目的基因的碱基序列选择恰当的DNA限制性内切酶,通过酶切将不同基因型的目的基因切为长短不同的片段,最后通过琼脂糖凝胶电泳观察酶切片段的数量及大小,来判断基因型。结果(1)对于C698T位点,病例组CT基因型携带频率为40(15.75%),对照组CT型基因携带频率为16(7.02%),采用卡方检验,差别具有统计学意义(OR=2.477,95%CI=1.346~4.558,P=0.003);(2)对于G901A位点,病例组AG基因型携带频率为14(5.51%),对照组AG型基因携带频率为19(8.33%),采用卡方检验,差别无统计学意义(OR=0.642,95%CI=0.314~1.311,P=0.221);(3)采用非条件logistic回归分析,在调整体重指数、腰臀比、低密度脂蛋白、高血压病史、糖尿病病史、吸烟史等混杂因素后,C698T位点在两组间的CT基因型分布频率差别仍具有统计学意义(OR=2.520,95%CI=1.076~5.317,P=0.033);(4)交互作用分析显示,C698T位点与吸烟及高血压病均不存在交互作用(相对超危险度比RERI95%CI包含0)。结论(1)C5L2基因C698T与大动脉粥样硬化型脑梗死的患病相关,为大动脉粥样硬化型脑梗死的危险因素;(2)G901A位点与大动脉粥样硬化型脑梗死的患病无关联性;(3)C698T位点与吸烟及高血压病均不存在交互作用。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R743.3
【图文】：

凝胶,产物,电泳

研究内容与方法mm 下的 A260 值和 A280 值，然后计算 A260/A280 比值（OD 值）。DNA：OD 值在 1.7~1.9 之间，证明 DNA 纯度较高，且无蛋白质及 RNA 污染合标准的合格 DNA 提取产物置于-80℃冰箱中备用。 PCR 反应体系及反应条件查阅文献及预实验调整，C5L2 基因 C698T 和 G901A 两个位点的扩增引条件如表 3、表 4，其过程主要包括预变性、变性、退火、延伸、再延为 25ul，包括 DNA 产物 1ul、上游引物 1ul、下游引物 1ul、2×PoweterMix 12.5ul，不足部分双蒸水补足。

位点,凝胶,电泳,加样

青岛大学硕士学位论文PCR 产物电泳鉴定配置 2%的琼脂糖凝胶，方法同前。按顺序依次将 PCR 产物加样，加样量为 5ul，同时选择一个加样孔加ul 作为参照，判断目的基因的位置；将加样后凝胶置于电泳池中，电泳液没过凝胶约 1mm，100V 电泳 3紫外灯下曝光显影。根据 DNA Marker 条带判断 PCR 产物位置是否根据 PCR 产物条带是否清晰、单一、有无弥散及拖尾判断 PCR 产物位点的 PCR 产物显影结果如图 2（C698T 位点）、图 3（G901A 位点

位点,凝胶,产物,电泳

紫外灯下曝光显影。根据 DNA Marker 条带判断 PCR 产物位置是否据 PCR 产物条带是否清晰、单一、有无弥散及拖尾判断 PCR 产物点的 PCR 产物显影结果如图 2（C698T 位点）、图 3（G901A 位点图 2：C698T 位点 PCR 产物电泳凝胶显影结果

【参考文献】