microRNA在糖尿病脑病大鼠海马组织及细胞中的表达

发布时间：2020-08-18 10:14

【摘要】：目的:通过检测糖尿病脑病(Diabetic Encephalopathy,DE)大鼠海马组织中及大鼠原代海马神经元中microRNA表达变化,探讨其在DE的发病机制中的作用。方法:我们利用随机数字表法随机选取10只大鼠为对照组,其余30只为造模组。应用链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)大鼠模型,并淘汰未成模大鼠。在造模第22周,利用Morris水迷宫实验,比较各组大鼠的逃避潜伏期、穿越平台次数。逃避潜伏期延长,说明DM大鼠学习能力受损,穿越平台次数增多,说明DM大鼠记忆能力受损。从已成模的DM大鼠中筛选DE大鼠模型,设定为DE组,其余成模大鼠为DM组。在造模第24周,对各组大鼠进行麻醉,剥离并冻存完整大鼠海马组织。同时,取出生24小时内的SD新生鼠,剥离出完整的海马组织进行原代海马神经元分离培养,并应用特异性标志物微管相关蛋白2(Microtubule-associated protein 2,MAP-2)进行细胞鉴定。利用不同浓度的H_2O_2、高糖、甘露醇孵育原代海马神经元细胞建立细胞损伤模型。应用TargetScan软件筛选出可能与DE相关的miRNAs,利用实时荧光定量PCR方法对DE大鼠模型海马组织和原代海马神经元细胞损伤模型中的目标miRNAs分别进行测定。结果:6只DM大鼠发展为DE大鼠。各组逃避潜伏期均逐渐缩短,第1~2天,各组大鼠逃避潜伏期无统计学差异(P0.05),第3-5天,DE组与CON组和DM组之间的差异均有统计学意义(P0.05)(见图2)。通过第6天空间探索实验,CON组大鼠与DM组、DE大鼠穿越平台路程比率有统计学意义(P0.05)。各组之间穿越平台次数有下降趋势,但差异无统计学意义(P0.05)(见图3)。对培养第9天的原代海马神经元进行MAP-2免疫荧光染色,镜下可见大量海马神经元(见图1)。应用TargetScan软件可筛选出10个可能与DE相关的目标microRNA,分别为:miR-132、mi R-30、miR-138、miR-124、miR-128、miR-155、miR-182、mi R-103、miR-107、miR-15。应用Real-time PCR对DE大鼠海马组织和原代海马神经元细胞损伤模型中的目标miRNAs进行验证,结果显示,mi R-15、miR-132在组织和细胞中表达量较对照组均明显下降。(见图5、图6)结论:糖尿病脑病大鼠学习和记忆能力明显下降,认知功能明显受损。糖尿病脑病大鼠海马组织和细胞中miR-15b,mi R-132表达一致,均降低。mi R-15、miR-132表达的下降可能参与了糖尿病脑病发生的分子生物学过程。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.2;R747.9
【图文】：

原代神经元,新生鼠,免疫荧光染色,海马

图 1 SD 新生鼠海马原代神经元的免疫荧光染色Fig.l Immunofluorescent staining of primary hippocampal neurons in neonatalSD ratsCells were stained with anti-MAP2 antibody and MAP2-positive neurons

天平,水迷宫

图 2 水迷宫前 5 天平均潜伏期Fig.2 Latency of Morris water maze test in first five days was significant difference between CON group and DE grou.05) ，significant difference between DE group and DM group( P<0.05 was no significant difference between DM group and CON grou

平台,路程,次数

图 3 穿越平台路程比（A）和穿越平台次数（B）Fig.3 Latency (A) and crossing platform times (B)re was significant difference in the distances across the platformN group, DM group and DE group (P<0.05). There was no

【参考文献】