TRIM29对胶质瘤增殖与成瘤能力的影响及其机制的初步探索

发布时间：2020-08-19 13:26

【摘要】：背景胶质瘤是成人脑部最常见的原发肿瘤,平均每年每10万中约为4-5人发病,并且其死亡率显著高于其他脑肿瘤。尽管在过去的几十年间,神经外科手术治疗与放射治疗的发展取得了长足的发展,但作为中枢神经系统最为常见的原发性肿瘤,胶质瘤的中位生存时间也仅仅在15个月左右。因此,研究胶质瘤发生发展的机制,并为寻找新的治疗胶质瘤的靶点提供理论基础,就显得尤为重要。TRIM29(tripartite motif-29),也被称作ATDC,属于TRIM蛋白家族的一员,该家族由70多名成员组成。TRIM蛋白家族以拥有一系列保守的结构域结构为特征,其中包括B-box1型(B1),B-box2型(B2)和RING指和卷曲螺旋(RBCC)结构域基元。目前研究显示,TRIM家族参与调节了多种生物学进程,例如细胞发育、分化、凋亡及肿瘤发生等。TRIM29(ATDC)基因位于染色体11q23位置,其最初被认为是遗传病共济失调毛细血管扩张中的异位基因,并发现其可以增加细胞的辐射抗性。据报道显示,TRIM29在多种肿瘤中发挥着重要的作用,其与肿瘤细胞的增殖、迁移以及成瘤能力等密切相关,但目前在胶质瘤中还未见到明确报道及研究。目的本研究旨在探究TRIM29在胶质瘤中的表达与患者临床特征的相关性、以及TRIM29对胶质瘤细胞增殖、迁移和成瘤性的影响,并对其内在机制进行初步探索。方法1.通过免疫组织化学法检测56例胶质瘤组织和正常脑组织中的TRIM29蛋白表达,并分析胶质瘤组织中TRIM29蛋白的表达与临床病理特征间的关系。通过Western blot法在胶质瘤常见细胞株(A172、LN-229、U-87 MG、U-118MG)中检测TRIM29蛋白的表达谱。2.利用RNA干扰技术获得稳定敲低的shTRIM29组细胞。并通过Transwell、MTT、BrdU及软琼脂克隆形成实验,检测TRIM29对胶质瘤细胞迁移、增殖能力的影响。3.通过裸鼠皮下成瘤模型的构建,检测TRIM29在体内对胶质瘤细胞增殖、成瘤能力的影响。4.采用Western blot法检测TRIM29对AKT信号通路相关蛋白的影响,探究TRIM29调节胶质瘤增殖、成瘤、迁移能力的内在机制。结果1.免疫组化结果显示,TRIM29蛋白表达在胶质瘤组织中多以强阳性表达为主,而在正常脑组织中则多为阴性或弱阳性表达为主。此外,通过相关性分析发现,TRIM29在胶质瘤中的表达与肿瘤WHO分级呈正相关(r=0.535,P0.05);与年龄、性别等无明显相关性(P0.05)。Western blot法检测显示,TRIM29在胶质瘤常见细胞株A172、LN-229、U-87 MG、U-118MG中均有表达,且在恶性程度较高的U-87 MG细胞株中的表达量明显高于其他细胞株,故选取该细胞株进行后续实验。2.RNA干扰处理后,得到TRIM29稳定敲低的shTRIM29组的U-87 MG细胞。Transwell、MTT、BrdU及软琼脂克隆形成实验结果显示,敲低TRIM29可明显抑制胶质瘤细胞的迁移能力,同时BrdU标记阴性细胞数量下降,细胞的克隆形成能力也明显减弱,说明TRIM29在胶质瘤细胞增殖、迁移中发挥重要作用。3.裸鼠体内成瘤实验结果提示,敲低TRIM29后肿瘤的生长速度减慢,体积降低,同时Ki67的表达量也明显降低。4.通过Western blot检测发现,TRIM29的敲低可引起AKT的活化形式p-AKT表达的降低。结论1.TRIM29在胶质瘤组织中表达上升,与胶质瘤的WHO分期呈正相关,同时TRIM29在胶质瘤细胞株中均有表达,且在恶性程度较高的U-87MG细胞中表达明显升高,提示TRIM29的高表达与胶质瘤的恶性程度密切相关。2.下调TRIM29的蛋白表达可抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移能力。3.下调TRIM29的表达,可在体内抑制胶质瘤细胞的增殖、成瘤能力,说明TRIM29是影响胶质瘤发展的关键因素。4.TRIM29可能通过AKT信号通路,对胶质瘤细胞的增殖、成瘤、迁移进行调控。
【学位授予单位】：中国人民解放军陆军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.4
【图文】：

胶质瘤

A:TRIM29 在正常脑组织中阴性表达；B:TRIM29 在胶质瘤细胞中阳性表达图 2.3.1 TRIM29 在正常脑组织和胶质瘤组织中的表达.2 胶质瘤组织中 TRIM29 蛋白的表达与临床特征的关系。对胶质瘤患者TRIM29的表达与临床病理特征的关系进行Spearman 相关，TRIM29 的表达与胶质瘤 WHO 分级呈正相关（r=0.535,P＜0.05），具29 表达越高，胶质瘤的恶性程度越高，但与患者年龄、性别无明显相关表 2.3.1 TRIM29 在 56 例胶质瘤标本中的表达及临床病理参数理特征例数 TRIM29 表达量 P*值低表达高表达龄 0.0640 岁 36 14 22

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图 2.3.2 胶质瘤细胞株中 TRIM29 的蛋白表达.0 统计软件进行数据分析；两组间比较采用 t 检。检验水准：α=0.05。经外科最为常见的恶性肿瘤，其发病率和致死率、放疗、化疗等治疗手段都取得了飞速的进步，仅在 15 个月左右，因此，寻找新的治疗方法便显生发展的机制研究越发受到重视，在内在机制上医疗发展的重点和热点。寻找影响胶质瘤发展进

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陆军军医大学硕士学位论文3.3 实验结果3.3.1 通过 RNA 干涉胶质瘤细胞 U-87 MG 中 TRIM29 的表达情况检测通过慢病毒 RNA 干扰技术，我们对人胶质瘤细胞 U-87 MG 中的 TRIM2敲低，结果得到稳定敲低 TRIM29 的 shTRIM29（实验组）U -87 MG 细胞shScramble 组（对照组）作为实验对照细胞。通过对两组 U-87 MG 细胞进行测，结果显示，shTRIM29(实验组)细胞中 TRIM29 蛋白的表达水平明显低于组（对照组）细胞，说明胶质瘤细胞 TRIM29 已成功敲低，可用作后续实验。（

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