TOP2A对髓母细胞瘤增殖、迁移、侵袭及放射抗性的影响

发布时间：2020-08-19 14:52

【摘要】：目的:髓母细胞瘤是中枢神经系统最常见的恶性胚胎性肿瘤,但放射抗性的存在严重制约着放疗效果。本研究旨在探索TOP2A对Daoy细胞增殖、迁移、侵袭及放射抗性的影响,并进一步探索其发生发展的分子机制。方法:通过检索GEO全基因组芯片数据库分析得到在目标基因,并利用Realtime-PCR检测配对组织中的表达情况,应用lipofectamine RNAiMAX reagent将siRNA转染入细胞,Western blot及Realtime-PCR检测转染效率;CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化;细胞划痕实验及Transwell迁移实验检测细胞迁移能力变化;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化;通过单机多靶模型处理克隆形成实验结果得到细胞拟合生存曲线,计算放射敏感性参数D_0、Dq、SF_2;最后Western blot检测Wnt通路相关蛋白的表达。结果:1.通过检索GEO数据库得到GSE35493、GSE39182、GSE50161、GSE74195四个芯片组集,经过差异分析选择BRAD1、TOP2A以及TMSB15A三个目标基因。2.CCK-8实验结果表明:不论是接受6MV-X线照射的细胞(P(Blank vs si-TOP2A)0.001,P(NC vs si-TOP2A)0.001)还是未接受照射的细胞(P(Blank vs si-TOP2A)0.001,P(NC vs si-TOP2A)0.001),敲低TOP2A后细胞增长速度较对照组明显降低。3.细胞划痕实验发现,敲低TOP2A后细胞伤口愈合率明显低于对照组(非照射情况下,P(Blank vs si-TOP2A)=0.0071,P(NC vs si-TOP2A)=0.0328;照射情况下,(P(Blank vs si-TOP2A)=0.0028,P(NC vs si-TOP2A)=0.0021);Transwell迁移实验显示:敲低TOP2A后细胞迁移率较对照组明显降低(非照射情况下,P(Blank vs si-TOP2A)=0.0061,P(NC vs si-TOP2A)=0.0387;照射情况下,(P(Blank vs si-TOP2A)=0.0054,P(NC vs si-TOP2A)=0.0015)。3.Transwell侵袭实验表明,敲低TOP2A后穿过基质胶的细胞数量较对照组明显降低(非照射情况下,P(Blank vs si-TOP2A)=0.0280,P(NC vs si-TOP2A)=0.0090;照射情况下,(P(Blank vs si-TOP2A)=0.0337,P(NC vs si-TOP2A)=0.0144)。4.平板克隆形成实验结果发现敲低TOP2A后细胞形成的克隆数量明显低于对照组。5.Western blot结果发现敲低TOP2A后,β-catenin表达下降。结论:1.TOP2A低表达时,Daoy细胞的增殖、迁移以及侵袭能力明显下降。2.TOP2A低表达时Daoy细胞放射抗性降低。3.TOP2A对于Daoy增殖、迁移、侵袭以及放射抗性的影响可能是通过Wnt信号通路实现的。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.4
【图文】：

estren blot）实验检测 TOP2A 蛋白的P2A 的细胞 TOP2A 表达显著低于空 3 siRNA 敲低效率的验证l of TOP2A in Daoy cells transfectedgroup, ***P<0.001, **P<0.01, *P<0.0<0.001,###P<0.001,#P<0.05. The mR74 group was decreased significantlyABlank NC si-TOP2A

图 10 TOP2A 和 β-catenin 蛋白的表达情况Fig.10 The expression of TOP2A and β-catenin讨 论髓母细胞瘤起源于小脑颗粒细胞的高度恶性肿瘤，生长迅速、手术切除、易通过脑脊液播散。20 世纪 70 年代的研究发现即使术后联合放疗，患者 5 年无进展生存也可达到 45%左右[9]。随着对 MB 认识的及相关临床实验的开展，目前治疗方案为依据不同危险分层进行术后疗，虽然全中枢神经系统放射治疗可带来一系列近期及远期反应——肿、颅内压升高、听力丧失、甲状腺功能减退、认知功能减退等[10]，其在髓母细胞瘤治疗中仍是至关重要的。放射抗性严重制约着患者的效果，因此研究其发生发展的分子机制至关具有重要意义。

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本文编号：2797221