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帕金森病异常表达microRNAs的筛选及microRNA-1976作用机制的初步研究

发布时间:2020-08-19 16:09
【摘要】:目的筛选并验证与帕金森病相关的差异microRNA(miRNAs),初步探讨miR-1976在帕金森病发展中的作用机制。方法随机选取28例帕金森患者及对照组35例为研究对象。采用μParaflo溲微流体芯片技术筛选与帕金森病相关的差异miRNAs,针对组间差异表达3倍以上、且组内差异小的8个miRNAs,进行实时PCR验证芯片重复性,并进一步构建miR-1976过表达慢病毒,通过电子显微镜及流式细胞仪检测miR-1976过表达组多巴胺能神经元细胞凋亡情况。结果微流体芯片技术筛选出18个PD相关的差异表达miRNAs基因,表达差异3倍以上的8个基因是miR-1976、miR-153、miR-103a、miR-29a、miR-210、miR-375、miR-146a、miR-101a,miR-1976的表达差异最大,结果与miRNA芯片检测结果一致。miR-1976过表达组中发现凋亡小体形成,细胞凋亡率显著增加。结论 miR-1976是一个高差别表达的miRNA,具有促进多巴胺能神经元凋亡的功能,可能为帕金森病患者新的生物标志物。
【图文】:

血清,多巴胺能神经元,过表达,细胞凋亡


29a、miR-210、miR-375、miR-146a、miR-101a。2.2实时荧光定量PCR采用实时荧光定量PCR技术,验证芯片检测结果验证部分差异miRNAs在PD组及NC组血清中的表达(图1),结果发现miR-1976的表达差异最大,在PD组中其表达量为NC组的5.64倍,具有显著的统计学差异(P<0.01),结果与miRNA芯片检测结果一致。2.3miR-1976过表达对多巴胺能神经元细胞凋亡的影响构建miR-1976过表达慢病毒,感染体外培养的MES23.5多巴胺能神经元细胞株,电子显微镜下观察发现,感染miR-1976过表达慢病毒载体12h后,多巴胺能神经元细胞明显有凋亡小体形成(图2);流式细胞仪技术检测发现,miR-1976过表达组多巴胺能神经元细胞凋亡显著增加(图3)。图1验证miRNAs在PD组和NC组受试者血清中的表达(与NC组比较,**P<0.01,***P<0.001)图2电镜下多巴胺能神经元细胞的凋亡情况(×3700)图3多巴胺能神经元细胞的凋亡情况临床神经病学杂志2017年第30卷第3期·173·

多巴胺能神经元,电镜,情况,过表达


29a、miR-210、miR-375、miR-146a、miR-101a。2.2实时荧光定量PCR采用实时荧光定量PCR技术,验证芯片检测结果验证部分差异miRNAs在PD组及NC组血清中的表达(图1),结果发现miR-1976的表达差异最大,在PD组中其表达量为NC组的5.64倍,具有显著的统计学差异(P<0.01),结果与miRNA芯片检测结果一致。2.3miR-1976过表达对多巴胺能神经元细胞凋亡的影响构建miR-1976过表达慢病毒,感染体外培养的MES23.5多巴胺能神经元细胞株,电子显微镜下观察发现,感染miR-1976过表达慢病毒载体12h后,多巴胺能神经元细胞明显有凋亡小体形成(图2);流式细胞仪技术检测发现,miR-1976过表达组多巴胺能神经元细胞凋亡显著增加(图3)。图1验证miRNAs在PD组和NC组受试者血清中的表达(与NC组比较,**P<0.01,***P<0.001)图2电镜下多巴胺能神经元细胞的凋亡情况(×3700)图3多巴胺能神经元细胞的凋亡情况临床神经病学杂志2017年第30卷第3期·173·

多巴胺能神经元,情况,过表达


29a、miR-210、miR-375、miR-146a、miR-101a。2.2实时荧光定量PCR采用实时荧光定量PCR技术,验证芯片检测结果验证部分差异miRNAs在PD组及NC组血清中的表达(图1),结果发现miR-1976的表达差异最大,在PD组中其表达量为NC组的5.64倍,具有显著的统计学差异(P<0.01),结果与miRNA芯片检测结果一致。2.3miR-1976过表达对多巴胺能神经元细胞凋亡的影响构建miR-1976过表达慢病毒,感染体外培养的MES23.5多巴胺能神经元细胞株,电子显微镜下观察发现,感染miR-1976过表达慢病毒载体12h后,多巴胺能神经元细胞明显有凋亡小体形成(图2);流式细胞仪技术检测发现,miR-1976过表达组多巴胺能神经元细胞凋亡显著增加(图3)。图1验证miRNAs在PD组和NC组受试者血清中的表达(与NC组比较,**P<0.01,***P<0.001)图2电镜下多巴胺能神经元细胞的凋亡情况(×3700)图3多巴胺能神经元细胞的凋亡情况临床神经病学杂志2017年第30卷第3期·173·

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