慢性应激诱发大鼠前额皮质炎性反应及小胶质细胞重构

发布时间：2020-08-22 08:42

【摘要】：目的:通过建立慢性不可预见温和应激和慢性疼痛应激大鼠模型,(1)观察两种不同应激条件下大鼠行为的改变状况;(2)根据两种不同应激后大鼠行为改变与前额皮质炎性因子的关系,确定炎症反应是否为应激的中枢机制;(3)同时比较大鼠左右前额皮质炎性因子水平的改变情况,观察心理与生理不同应激导致的炎症改变是否存在偏侧化问题;(4)观察两种不同应激对大鼠前额皮质小胶质细胞的形态变化,确定其是否参与心理与生理不同应激导致的炎症反应过程;(5)同时比较大鼠左右前额皮质小胶质细胞的形态变化情况,进一步观察是否也存在偏侧化的现象。方法:将雄性Sprague-Dawley大鼠随机分配到空白组、心理应激组、假手术组和疼痛应激组,建立慢性心理应激模型和慢性疼痛应激模型。评价(1)一般生理指标包括:大鼠每周的体重变化,痛觉阈限变化;(2)行为实验包括糖水偏好实验和痛敏实验;(3)神经生物学实验主要采用RT-PCR实验检测大鼠前额皮质中炎性因子水平(IL-1β、IL-6、TNF-α);(4)大鼠前额皮质中小胶质细胞形态结构变化(胞体周长、来源于胞体的分支数量、分支点、细胞分支总长度和细胞表面积)。结果:(1)慢性心理和疼痛应激都导致大鼠出现抑郁样行为改变,心理应激组大鼠每周体重增加量都显著低于空白组;糖水偏好实验中心理应激组的糖水偏好显著低于空白组,疼痛组的糖水偏好显著低于假手术组;结果显示两种应激均建模成功。(2)痛敏实验显示,心理应激组中左足(手术)和右足(非手术)的痛觉阈限相比空白组都显著降低,疼痛组中手术脚的痛觉阈限相比假手术组显著降低。(3)心理和疼痛应激均导致大鼠前额皮质中炎性因子水平发生改变,心理应激组大鼠的IL-1β和TNF-α的mRNA表达显著低于空白组,疼痛组中IL-1β和IL-6的mRNA表达显著低于假手术组。(4)慢性心理和疼痛应激条件下,大鼠前额皮质小胶质细胞的形态结构发生变化,心理应激组的Iba-1表达水平、小胶质细胞胞体周长、细胞分支点、细胞分支总长度、来源于胞体的分支数和细胞表面积都显著高于空白组,疼痛组的Iba-1表达水平、小胶质细胞分支点、细胞分支总长度、来源于胞体的分支数和细胞表面积都显著高于假手术组。结论:(1)慢性应激对大鼠行为的影响具有非特异性,主要表现为出现抑郁样行为以及痛觉阈限的降低;(2)慢性应激的中枢神经机制表现为大鼠前额皮质的炎症反应,其中IL-1β是炎症反应的重要调节因子;(3)大鼠前额皮质中小胶质细胞激活及细胞结构重构是慢性应激诱发相关行为障碍的重要反应;(4)慢性应激引起的前额皮质炎性反应及小胶质细胞的重构没有偏侧化现象。
【学位授予单位】：浙江理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R741
【图文】：

图 2.1 技术路线图3 材料和方法3.1 动物及分组雄性 Sprague-Dawley 大鼠 104 只，体重为 280±20g。饲养于温度为22±2℃、湿度为 50%～60%的恒温恒湿环境中，通风 8-15 次/h。正式试验前饲养 10 天以适应环境，适应期间每天进行抓取训练，使其适应实验者的操作。10天后随机分为空白组、心理应激组、疼痛组、假手术组。空白组、疼痛组、假手术组 2 只/笼群养，12/12h 昼夜循环，自由进食进水。心理应激组采取孤养的方式，并参照 Willner 等的方法, 采用 35 天慢性不可预见性温和应激建立大鼠慢性应激模型。疼痛组采用坐骨神经损伤模型，35 天，12/12h 昼夜循环，自由

图 4.2 糖水偏好实验结果图：（M±SEM）糖水偏好=糖水摄入量/（糖水摄入量+水摄入量），*表示 p＜0.05。4.2 慢性应激和慢性疼痛对大鼠痛敏的影响在大鼠的痛敏实验中，采用 Von Frey 法测得 50%机械性缩足阈值，通过 检验发现，应激开始之后，每一周空白组的左足（手术足）痛敏阈限都显著高于心理应激组（第一周 t（22）=4.432，p<0.001；第二周 t（22）=5.138，p<0.001；第三周 t（22）=4.982，p<0.001；第四周 t（22）=3.434，p<0.001；第五周 t（22）=5.815，p<0.001）、假手术组的左足痛敏阈限都显著高于疼痛组（第一周 t（21）=4.495，p<0.001；第二周 t（21）=4.568，p<0.001；第三周 t（21）=7.018，p<0.001；第四周 t（21）=5.151，p<0.001；第五周 t（21）=6.118，p<0.001）。

p<0.001），其他三组组内左右足之间痛敏没有显著性差异。表 4.3 大鼠痛敏实验数据结果（M±SEM）别 空白组 心理应激组 假手术组 疼痛组 12 12 11 12左足 右足 左足 右足 左足 右足 左足 右足始 4.5±0.6 5.0±0.5 5.2±0.5 5.2±0.5 4.9±0.6 5.4±0.7 4.3±0.5 4.7±0.6一周 4.1±0.5 5.2±0.6 1.8±0.2***1.7±0.1***2.1±0.4 2.3±0.3 0.5±0.04###2.1±0.3+++二周 4.5±0.5 5.0±0.5 1.7±0.2***2.4±0.4***2.1±0.4 2.7±0.6 0.5±0.03###2.6±0.5+++三周 4.7±0.6 4.3±0.4 1.5±0.1***2.0±0.3***3.7±0.5 4.0±0.7 0.4±0.1###2.8±0.4+++四周 4.8±0.7 5.7±0.7 2.1±0.4***2.4±0.4***3.5±0.6 3.7±0.6 0.4±0.04###3.2±0.6+++五周 4.8±0.4 5.5±0.7 2.0±0.3***2.2±0.3***3.4±0.5 3.3±0.6 0.4±0.04###3.7±0.6+++注： ***表示与空白组同侧足组相比 p<0.001， ###表示与假手术组同侧足组相比 p<0.001，+++表示与疼痛组左侧足组相比 p<0.001。

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本文编号：2800482