miR-34a通过其靶基因MMP2影响脑胶质瘤细胞侵袭迁移实验研究

发布时间：2020-08-26 20:11

【摘要】：目的:通过检测miR-34a与MMP2在脑胶质瘤细胞株中的表达情况,探讨miR-34a通过其靶基因MMP2对脑胶质瘤细胞侵袭迁移的影响。方法:采用荧光定量PCR检测miR-34a,荧光定量PCR及western blot检测MMP2在脑胶质瘤细胞株中的表达情况;选取U87与A172,使用miR-34a摸拟物、miR-34a抑制剂进行分组转染,通过qRT-PCR观察miR-34a,qRT-PCR及western blot观察MMP2的表达水平;应用mRNA数据库预测miR-34a结合MMP2区域,然后构建出野生型与突变型MMP2 3’UTR荧光素酶质粒以及miR-34a质粒,采用荧光素酶报告基因实验;通过Transwell侵袭以及划痕实验对U87细胞侵袭迁移能力进行观察。结果:(1)各株脑胶质瘤细胞株内MMP2蛋白含量均高表达,其中以U87、A172最明显,MMP2的mRNA表达水平与其蛋白基本一致,但miR-34a的mRNA水平的表达相对偏低,miR-34a的mRNA表达水平与MMP2呈负相关,MMP2可能为miR-34a下游靶基因。(2)将miR-34a mimic、抑制剂转染U87与A172细胞后,转染mimic细胞株内MMP2的蛋白及mRNA水平均明显降低,转染抑制剂细胞株内MMP2的蛋白及mRNA水平均明显升高。(3)将野生型与突变型MMP2 3’UTR区的荧光素酶质粒分别与pcDNA5-miR-34a质粒转入U87与A172细胞后,实验组突变型MMP2 3’UTR区荧光素酶活性与空白对照组无明显差异,但实验组野生型MMP2 3’UTR区荧光素酶活性较空白对照组明显下降。(4)通过Transwell侵袭实验与划痕实验检测细胞侵袭迁移显示,miR-34a可抑制肿瘤侵袭迁移,且可逆转因MMP2增强的侵袭迁移能力使其下降。结论:(1)miR-34a的mRNA表达水平与MMP2的mRANA表达呈负相关,MMP2可能为miR-34a下游靶基因。(2)脑胶质瘤细胞株内miR-34a可通过结合MMP2 3’UTR区的特定序列来下调MMP2的蛋白及mRNA表达水平。(3)脑胶质瘤内miR-34a为抑癌基因,其通过下调MMP2的表达来对脑胶质瘤细胞的侵袭迁移产生抑制作用。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.4
【图文】：

脑胶质瘤细胞,表达水平,蛋白

采用 western blot 法检测 MMP2 蛋白在各株脑胶质瘤细胞株内的表达情况，并以 HEB 细胞作为参照。结果显示，MMP2 蛋白在各株脑胶质瘤细胞株内呈高表达，其中以U87及A172的MMP2蛋白表达最为显著，见图3.1A。通过qRT-PCR技术检测 miR-34a 与 MMP2 mRNA 的表达水平，结果显示 MMP2 的 mRNA 表达水平与其蛋白表达水平大致相同，对于 miR-34a 的 mRNA 则呈低表达水平，miR-34a 与 MMP2 的 mRNA 表达呈现出负相关的关系，见图 3.1B。可以推测miR-34a 在脑胶质瘤细胞株内的 mRNA 表达水平与 MMP2 呈负相关的关系，MMP2 可能为 miR-34a 的下游靶基因。A：各脑胶质瘤细胞株内 MMP2 蛋白的表达水平；B：各脑胶质瘤细胞株内 miR-34a 与 MMP2的 mRNA 表达水平图 3.1：miR-34a 与 MMP2 在各种脑胶质瘤细胞株内的表达情况3.2 下调 miR-34a 对 MMP2 蛋白及 mRNA 表达的影响筛选 MMP2 表达水平相对较高的 U87 与 A172 细胞以更好地观察 MMP2 蛋白及 mRNA 表达变化情况。分别向 U87、A172 细胞转染 miR-34a mimic 与抑制剂，采用qRT-PCR法明确miR-34a的mRNA高表达及产生抑制作用后（图3.2A），然后再通过 qRT-PCR 法、western blot 法提取 MMP2 蛋白及 mRNA

miR-34a通过其靶基因MMP2影响脑胶质瘤细胞侵袭迁移实验研究

miR-34a通过与MMP2mRNA3’UTR结合来下调MMP2的表达

脑胶质瘤,迁移能力

miR-34a通过调控MMP2的表达对脑胶质瘤侵袭迁移能力产生的影响……

【参考文献】