核转录因子ΚB涉及抗水通道蛋白-4抗体阳性血清对星形胶质细胞的毒性作用

发布时间：2017-04-01 13:02

  本文关键词：核转录因子ΚB涉及抗水通道蛋白-4抗体阳性血清对星形胶质细胞的毒性作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD)是主要累及视神经和脊髓的一种中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病,常反复复发导致失明及瘫痪。迄今为止尚无有效的治疗方法。探讨其发病机制对寻找有效的治疗药物具有重要意义。目前认为NMOSD患者自身抗体即抗水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP4)抗体和星形胶质细胞突触膜上的AQP4结合,通过补体依赖性细胞毒性作用引起星形胶质细胞死亡和激发炎症反应等是其主要的发病机制。核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NFκB)在炎症反应的调控中发挥重要作用,其涉及许多中枢神经系统疾病如多发性硬化等的发病机制。最近一项研究表明AQP4抗体能激活体外培养星形胶质细胞的NFκB信号通路,但是否影响星形胶质细胞的生存和死亡尚不清楚。本研究使用抗AQP4抗体阳性血清处理培养纯化的星形胶质细胞,观察NFκB在抗AQP4抗体阳性血清诱导的星形胶质细胞损害中的作用。方法:经传代培养纯化新生SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,免疫细胞化学荧光检测纯度达95%以上用于实验。细胞随机分为4组:(1)对照组:10%的比例加入健康人血清;(2)吡咯醛二硫氨基甲酸(Pyrrolidinedithiocarbamic acid,PDTC)组:10μmol/L PDTC预先处理细胞1 h后加入10%比例的健康人血清;(3)抗体阳性组:10%的比例加入抗AQP4抗体阳性NMOSD患者血清;(4)PDTC预处理组:10μmol/L PDTC预先处理细胞1 h后加入10%比例的抗AQP4抗体阳性NMOSD患者血清。细胞培养12h后,采用免疫细胞化学荧光法观察各实验组NFκB p65入核情况,MTS试验检测各组活细胞存活度,使用western blot方法检测各组细胞内p65蛋白、磷酸化p65(phosphorylated p65,p-p65)蛋白的表达。所有数据采用均数±标准差表示,采用SPSS21.0统计软件处理。多组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),组间有显著差异者应用SNK(StudentNewman-Keuls test)行组间多重比较检验,P0.05认为差异有统计学意义。结果:1鉴定经传代培养的星形胶质细胞的纯度使用免疫细胞化学荧光法观察抗神经胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体标记的星形胶质细胞,结果显示经传代培养后的细胞中95%以上是星形胶质细胞;2抗AQP4抗体阳性血清降低星形胶质细胞的存活度,而PDTC预处理能减少其对星形胶质细胞的毒性作用使用MTS试验观察抗AQP4抗体阳性血清对星形胶质细胞的毒性作用以及PDTC预处理是否有保护效果。结果显示,对照组、抗体阳性组、PDTC预处理组光密度(optical density,OD)值分别为0.5411±0.017、0.3897±0.045和0.4380±0.005,各组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。而PDTC组(OD=0.5387±0.014)和对照组相比差异无统计学意义(P0.05);3抗AQP4抗体阳性血清引起星形胶质细胞NFκB p65入核为了观察抗AQP4抗体阳性血清是否激活星形胶质细胞NFκB通路,使用免疫细胞化学荧光法检测不同实验组NFκB p65入核情况。结果发现对照组、PDTC组均未见p65入核,抗体阳性血清组可见明显NFκB p65入核,而PDTC预处理能抑制p65由胞浆进入细胞核;4抗AQP4抗体阳性血清增加NFκB p-p65表达Western blot实验结果显示,对照组、PDTC组、抗体阳性组、PDTC预处理组NFκB p65蛋白表达水平分别为0.8029±0.045、0.7880±0.047、0.7821±0.059、0.7093±0.044,统计学分析显示差异无统计学意义(P0.05);而相对应的NFκB p-p65蛋白表达水平分别为0.7439±0.032、0.7279±0.020、0.8197±0.027、0.7027±0.020,其中对照组、PDTC组、PDTC预处理组p-p65蛋白表达水平无统计学差异(P0.05),抗体阳性组p-p65蛋白表达和其他三组差异有统计学意义(P0.05)。结论:1抗AQP4抗体阳性血清可通过激活NFκB途径诱导星形胶质细胞损伤,抑制NFκB活性对星形胶质细胞具有保护作用。2 NFκB信号通路的激活可能涉及NMOSD的发病机制。
【关键词】：视神经脊髓炎谱系疾病 水通道蛋白-4 星形胶质细胞 核转录因子κB
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R744.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-15
• 结果15-17
• 附图17-20
• 讨论20-22
• 结论22-23
• 参考文献23-26
• 综述 抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体与中枢神经系统炎性脱髓鞘性疾病26-36
• 参考文献31-36
• 致谢36-37
• 个人简历37

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本文编号：280637