硫辛酸抗大鼠周围神经缺血再灌注损伤的实验研究

发布时间：2020-09-22 08:47

　　目的国内外学者普遍认为,缺血再灌注损伤的主要原因是氧自由基的作用。在再灌注的过程中,氧自由基产生过多,对人体组织细胞造成不可逆的损伤。硫辛酸由于其抗氧化及神经保护作用,在临床上,已广泛应用于糖尿病周围神经病变。已有研究学者证实,周围神经的缺血再灌注损伤可以引起相应脊髓神经元的凋亡。为研究其可能在缺血再灌注损伤中的神经保护作用,我们建立了实验大鼠后肢的缺血再灌注损伤的模型。探究硫辛酸对SD大鼠腓总神经缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法42只雄性SD大鼠随机分为3组。对照组6只(1组)不做处理。LA(lipoic acid,硫辛酸)组和IR(Ischemia reperfusion,缺血再灌注)组各18只,用动脉夹阻断大鼠左侧后肢髂总动脉、髂内动脉和髂外动脉的血流1h、3h、6 h,建立不同时间的缺血模型后再灌注6h,IR组(2、4、6)和LA组(3、5、7)分别于再灌注前腹腔给药生理盐水或硫辛酸。再灌注后,根据步态、速度反射、脚趾伸展度、对捏掐的灵敏性、爪子的位置姿态、握力进行后肢的功能行为学评分。取大鼠腓总神经和脊髓做成4um的切片,染色并在光学显微镜下观察,研究腓总神经的水肿损伤的分级;脊髓运动神经元的凋亡情况;观察大鼠后肢缺血再灌注损伤过程中,硫辛酸对Caspase-3表达的影响。结果对照组大鼠的后肢站立、后爪抓握能力及行动功能正常。IR组实验大鼠的左后肢肢体运动功能明显受限,后肢功能评分明显降低,差异有统计学意义(P0.05);LA组中缺血3h和缺血6h大鼠的左后肢肢体功能评分高于IR组大鼠的左后肢肢体功能评分,差异有显著性(P0.05)。对照组腓总神经结构清晰。IR组腓总神经水肿程度均在3级以上,轴突出现水肿或萎缩较多,有些神经束膜血管扩张充血,神经轴索肿胀,神经髓鞘出现较多小泡甚至脱髓鞘改变。LA治疗后神经纤维水肿均在2级水平以下,轴突和髓鞘损伤也出现明显改善,神经束膜血管充血减轻。差异有统计学意义(p0.05)。对照组大鼠脊髓神经元形态基本正常,未见呈明显凋亡改变的细胞,神经元胞浆淡红色,尼氏体染色均匀;胞核规整,界限清楚,呈均一蓝色,核仁明显。IR组大鼠的脊髓神经元散在分布,胞核深染、固缩、染色质边缘化、核碎裂等呈凋亡改变的状态;神经元胞体不规则,尼氏体结构不清。LA组脊髓神经元形态基本正常,神经元尼氏体分布清晰。对照组脊髓未见凋亡神经元。IR组大鼠脊髓组织可见明显的凋亡阳性神经元,核大小不一,染色质深,有的细胞皱缩,胞内可见凋亡颗粒。LA组凋亡阳性神经元明显减少,差异有显著性(P0.05)。LA组大鼠缺血6h脊髓神经元凋亡率与IR组比较,差异有显著性(P0.05)。对照组Caspase-3不表达,IR组Caspase-3表达显著,LA组Caspase-3表达明显减少(P0.05)。结论下肢动脉的I/R(Ischemia/reperfusion,缺血再灌注)可造成腓总神经的损伤和脊髓神经元的凋亡,缺血越久,损伤越重。硫辛酸能够减轻神经水肿和脊髓的凋亡。Caspase-3参与了周围神经IRI的形成,LA可以抑制Caspase-3蛋白的表达。总之,我们的研究表明硫辛酸对腓总神经I/R损伤有保护作用。LA在周围神经IRI中能够通过抑制细胞凋亡来实现其保护作用。
【学位单位】：沈阳医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R745

【参考文献】