脑缺血与缺血再灌注脑脊液蛋白组学研究

发布时间：2020-09-22 21:29

　　 [目的]探讨脑缺血及脑缺血再灌注过程中,脑血流量的动态变化。研究脑缺血及脑缺血再灌注脑脊液的蛋白组学。[方法]1.用线栓法建立脑缺血及脑缺血再灌注模型,将135只SD大鼠,随机分为15组,每组9只。分别是sham组,缺血0.5h组,缺血2h组,缺血3h组,缺血4h组,缺血4.5h组,缺血6h组,缺血8h组,缺血0.5h再灌注2h组,缺血2h再灌注2h组,缺血3h再灌注2h组,缺血4h再灌注2h组,缺血4.5h再灌注2h组,缺血6h再灌注2h组,缺血8h再灌注2h组。2.本实验采用激光散斑血流仪测量五个脑区的血流值并对模型进行行为学评价及TTC染色。3.抽取脑脊液做蛋白组学分析。4.结合质谱结果,选取半暗带及梗死核的脑皮质进行Q-PCR实验。[结果]1.脑血流值随着缺血时间的延长逐渐降低,在4.5小时达到最低值,4.5h到8h脑血流量值有所回升。脑缺血4.5h后再灌注并不能使脑血流量增加。2.缺血2h组与缺血0.5h组相比梗死体积有明显增加,差异在梗死体积方面具有显著统计学意义(p0.01)。缺血6h组与缺血2h组相比梗死体积有明显增加,差异在梗死体积方面具有显著统计学意义(p0.01)。脑缺血2h组与脑缺血2h再灌注2h组相比,梗死体积有所增加,差异在梗死体积方面具有显著统计学意义(p0.01)。0.5h组比sham组的Zea-Longa评分明显升高,评分差异在神经功能评价方面显著统计学意义(p0.01)。缺血2h组与缺血0.5h组相比,其Zea-Longa评分有明显增加,差异在神经功能评价方面具有显著统计学意义(p0.01)。缺血6h组与缺血2h组相比Zea-Longa评分明显增加,差异在神经功能评价方面具有显著统计学意义(p0.01)。脑缺血2h组与脑缺血2h再灌注2h组比,Zea-Longa评分没有明显变化。3.相对于sham组,所有的缺血组的A0A0G2K0N6蛋白的表达均升高。Sham组脑脊液中存在而缺血组消失的蛋白经过pcr验证为:D3ZS41(细胞外基质蛋白2,编码基因为Ecm2)。在脑脊液中假手术组没有而手术组有的蛋白经过PCR验证发现Q5M842,A2NB82,F1M5L5的变化与质谱结果一致。脑缺血再灌注后脑脊液中含量升高的蛋白有P47942(编码基因为:Dpysl2),Q6LE95(编码基因为:Kng1),P09606(编码基因为:Glul)。脑缺血再灌注后降低的蛋白经过pcr验证发现为:F1LM84(编码基因为Nid1),F1LS40(编码基因为Colla2),P02454(编码基因为Colla1),M9NW49(编码基因为Igf2),F1MAA7(编码基因为Lamc1)的变化趋势与质谱结果一致。[结论]1.大鼠脑缺血再灌注的时间窗为4.5h之前,4.5h之后的再灌注可能会加重脑损伤。2.蛋白组学结果提示脑脊液中可能存在脑缺血早期的诊断标志物,例如:A0A0G2K0N6 蛋白、Ecm2 等。
【学位单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R743.3
【部分图文】：

集数据等一系列操作。逡逑２．将大鼠固定在立体定位仪上，用剃毛器剔去大鼠头顶绒毛，用手骨后缘正中纵切沿着矢状缝剪开，暴露出颅骨，将其表面的骨膜和沾染理干净，用生理盐水润湿。逡逑３．把颅骨放置水平，与射线垂直，激光射线定位在前颅和后颅的正整仪器检测镜头与头骨距离１５？２０邋ｃｍ，固定住射线后便不可移动位置。积为２５ｍｎｉＸ邋３４ｍｍ，手动或自动对焦至图像清晰，监测区域的散色光ＣＣＤ采集。逡逑４．对大鼠大脑五个区域进行脑血流量的监测采集，分别为：１、缺血２、缺血中心区对侧脑区，３、右侧脑区，４、左侧脑区，５：缺血区（如图１分别监测五个区域的血流值。逡逑

图２邋Ｌａｂｅｌ－ｆｒｅｅ定量蛋白质组学实验流程图逡逑２．８．２生物信息分析内容逡逑在蛋白质组学中，通过凝胶电泳、质谱等技术产生的海量数据代表了生物体逡逑内发生的全部过程及其变化。从这些庞大而复杂的实验数据中寻找生物体的改变逡逑以及引起这些改变的源头和机制，是蛋白质组生物信息学的主要任务。逡逑在定量蛋白质组学分析中，常用的生物信息学分析方法包括（但不局限于）：逡逑显著性差异分析、ＧＯ注释及富集分析、聚类分析。通常情况下，对目标蛋白集逡逑合的ＧＯ功能注释的步骤和流程大致可以归纳如下：逡逑

差异蛋白热图

【参考文献】

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1 吴珊珊;范宇威;高静;穆卫卫;张黎明;;S100B蛋白在神经系统疾病中的临床意义及进展[J];现代生物医学进展;2015年16期

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3 丁笑笑;石进;马潞娜;;单侧大脑中动脉狭窄患者脑血管储备力的评估[J];中华神经医学杂志;2014年02期

4 黄晓燕;徐娟;孙晓梅;代解杰;;树

本文编号：2824944