拉科酰胺与颞叶癫痫大鼠海马区CRMP-2及其磷酸化蛋白表达的相关性研究

发布时间：2020-10-19 18:23

　　 目的:探讨拉科酰胺与颞叶癫痫大鼠海马区CRMP-2及其磷酸化蛋白表达的相关性,从而明确拉科酰胺是否可以通过调节其表达发挥抗癫痫形成作用。方法:将大鼠随机分成三组:(1)假手术对照组(Control组),n=8;(2)癫痫组(SE组),n=20;(3)癫痫+拉科酰胺治疗组(SE+LCM组),n=20。SE组和SE+LCM组再按时间点分为3d(n=4)、7d(n=8)、14d(n=4)、28d(n=4)。分别于3d、7d、14d、28d 4个时间点将大鼠断头取海马,然后用Western Blot技术检测各组大鼠CRMP-2及其磷酸化蛋白表达水平。另外,通过制作石蜡切片、HE染色观察7d大鼠药物干预前后海马区病理损伤情况。结果:(1)SE+LCM组慢性期自发性发作大鼠数量较SE组少。(2)HE染色光镜下见SE组和SE+LCM组大鼠CA1区锥体细胞及DG区颗粒细胞形态正常,排列整齐,结构完整,与Control组大鼠比较无明显损伤。然而,CA3区锥体细胞可见明显损伤。其中SE组大鼠CA3区在由腹外方向转向腹内侧,且继续延伸插入齿状回部分神经元脱落、消失严重,仅遗留细胞碎片及散在的正常细胞;SE+LCM组大鼠CA3区仅在由腹外方向转向腹内侧部分见到神经元明显脱落、消失,其余部分神经元则相对保留完整。(3)SE组大鼠海马区CRMP-2蛋白表达在3d、7d、14d、28d 4个时间点呈现先升高后降低的趋势,而其磷酸化p Thr514蛋白则呈现先降低后升高的趋势。(4)拉科酰胺干预后颞叶癫痫大鼠海马区CRMP-2蛋白表达在急性期(3d、7d)、静止期(14d)和慢性期(28d)均较非药物干预组低,CRMP-2磷酸化p Thr514蛋白表达均较非药物干预组高,且结果有统计学意义(P0.05)。结论:(1)拉科酰胺抗癫痫同时具有神经元保护作用。(2)SE组大鼠海马区CRMP-2蛋白表达在3d、7d、14d、28d 4个时间点呈现先升高后降低的趋势,而其磷酸化p Thr514蛋白则呈现先降低后升高的趋势。(3)拉科酰胺可通过抑制CRMP-2蛋白表达并促进其磷酸化来抑制神经突起的生长,进而发挥抗癫痫形成作用。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R742.1
【部分图文】：

锥毒素对 Cav2.2 的抑制作用使轴突长度减小酸化，这使得多条信号通路在一个点上会聚性)CRMP-2 的平衡，改变这种平衡的激酶活性的变化将导致应变化。2.2.5CRMP-2的磷酸化调节通路GSK-3β 是 Akt 的下游基因在神经元极性测定中的关键分子分支，GSK-3β 的活性形式通过使酸化 CRMP-2 可能受两种不同机制的调控底物识别的变化。与许多底物一样是 GSK-3β 后续磷酸化（研究表明，CDK5 启动子的丢失是一。（见图 2.1）[30,31]。已知 CRMP-2 被这使得多条信号通路在一个点上会聚，即非磷酸化(活性)和改变这种平衡的激酶活性的变化将导致 CRM的下游基因，是负责神经元存活和轴突生长的在神经元极性测定中的关键分子。GSK-3β 失活或下调促进神经元轴CRMP-2 磷酸化减少轴突生长[32可能受两种不同机制的调控：1)GSK-3β 表达或活性与许多底物一样，CDK5 对 CRMP-2 的事先磷酸（pThr509、pThr514）的必要条件[33]。WilsGSK-3β 磷酸化 CRMP-2 活性降和CRM是负责神经元存活和轴突生长的32]表达或活性的事先磷酸

现配现用。（10）封闭液脱脂奶粉 5g0.01TBS 100ml充分溶解后，现配现用。（11）4%多聚甲醛多聚甲醛 40gNaH2PO42.965gNa2HPO429g双蒸水 1000ml加热至60C，充分溶解，过滤，调整PH至7.4，避光4℃保存。3.2 实验方法3.2.1 实验设计图

横轴在中线向右旁开 4.5mm，深度距颅骨表面 8.5mm。（见图 3.2）图 3.2 大鼠脑BLA定位图3.2.3 颞叶癫痫大鼠模型制备(1)将大鼠称重后用 10%水合氯醛以 3.5ml/Kg 腹腔注射麻醉；(2)用耳棒固定大鼠(俯卧位)的两外耳道于立体定位仪上，使耳廓对称外展，头左右不能晃动，大鼠躯干舒展，同时将切牙挂在齿杆上，并保证切牙紧靠齿杆；(3)剪除大鼠头部毛发，用 75%酒精消毒头部皮肤，取头颅正中做纵行切口，切开皮肤，分离颅骨上腱膜及颅骨外膜，充分暴露前囟、后囟及冠状缝；(4)将预先装有 0.4μg KA（制备 SE 组模型用）或等量 PBS（制备 Control 组模型用）的微量注射器固定于定位仪上，纵向移动游标卡尺调整前、后囟在同一高度上（误差＜0.05mm），然后使注射器尖端位于前囟，打开前后及左右按钮
【参考文献】

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本文编号：2847560