应用小分子化合物诱导骨髓间充质干细胞类神经分化的可行性研究

发布时间：2020-10-25 06:34

　　 目的探讨小分子化合物组合(Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021)诱导骨髓间充质干细胞分化为类神经细胞的可行性。方法采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察培养过程中细胞生长状态;流式细胞术检测第3代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105的表达情况。实验组取第3代细胞,以含有Forskolin的神经元培养基预诱导1天,再以含有Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021的神经元培养基正式诱导3天。对照组以神经元培养基培养细胞。使用倒置显微镜观察诱导过程中细胞形态变化并记录,免疫荧光法检测神经特异性标记物NSE、Nestin,Western blot技术检测NSE、Nestin、SOX1的表达情况。结果大鼠骨髓间充质干细胞以梭形细胞为主,可见长短不一的突起;3d后可见集落,集落细胞折光性强,中央有杂质;经流式细胞仪鉴定,CD90、CD105表达呈阳性,而CD34和CD45表达呈阴性,结果表明培养的骨髓间充质干细胞可用于后续实验。诱导后,细胞有明显神经样形态改变,免疫荧光检测到神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)阳性表达,诱导3天后Western blot显示诱导组与对照组相比NSE、Nestin和SOX1表达明显增多。结论1、培养的大鼠骨髓间充质干细胞中存在小分子化合物的作用基础;2、小分子化合物组合(Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021)可诱导BMSCs类神经分化。
【学位单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R741
【部分图文】：

图 1 观察 BMSCs 生长状态注：a 为原代细胞，b 为第 2 代细胞，放大倍数 100×二、流式细胞仪鉴定 BMSCs流式细胞仪检测培养的第 3 代 BMSCs 表面标志，结果显示间充质干细胞表面标志抗原 CD90、CD105 表达呈阳性，阳性率分别为 98.23%、99.27%；而造

图 2 流式细胞仪检测 CD34、CD45、CD90、CD105 阳性率、观察 BMSCs 诱导后的细胞形态诱导第 1d，可见少数细胞折光性变强，有较长突起；诱导第 2d，细胞形化更加明显，突触伸长，形成分支，并交织成网，呈神经细胞样形态折光性明显；诱导第 3d，突起增多，相互连接成网，如图 3。

11图 3 观察诱导过程中细胞形态变化注：a、b 分别为诱导第 1d、2d 细胞形态， c、d 为诱导第 3d 细胞形态，a、b、c 放大倍100×，d 放大倍数 400×
【参考文献】

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本文编号：2855602