白藜芦醇通过增强Sirt-1诱导的自噬活性抑制NLRP3炎性复合体活化减轻脑缺血再灌注损伤

发布时间：2020-10-31 15:06

　　 背景:The NOD-like receptor family,pyrin domaincontaining 3(NLRP3)炎性复合体是细胞内固有免疫系统中的一个重要的多蛋白复合物,由NLRP3 scaffold,the ASC(PYCARD)adaptor及pro-caspase-1组装而成。在内、外介导的因素的刺激下,NLRP3炎性复合体发生活化,可导致炎症级联瀑布反应,加重炎性损伤。现有研究表明,NLRP3炎性复合体介导的炎症级联反应在脑缺血再灌注损伤过程中具有重要作用;RSV具有减轻脑缺血损伤的保护作用,但是其具体的脑保护机制仍旧不甚清楚。目的:探究RSV能否通过抑制NLRP3炎性复合体介导的炎症反应减轻脑缺血再灌注损伤以及autophagy是否参与到RSV对NLRP3炎性复合体活化的抑制过程。此外,我们也探索了Sirt-1在RSV诱导的脑保护过程中的重要作用。方法:⑴采用Longa线栓法制做大鼠大脑中动脉栓塞(1h)再灌注(24h)模型,并于再灌注开始时给予RSV腹腔注射(100mg/kg)。⑵在大鼠MCAO术前30分钟进行3-MA(特异性autophagy抑制剂)的左侧脑室注射(600nmol、10ug/ul),之后再采用Longa线栓法制做大鼠MCAO模型并于再灌注启始时给予RSV处理(腹腔注射、100mg/kg)。⑶化学合成特异性Sirt-1 siRNA(sense primer 5-GCAGAUUAGUAAGCGUCUUTT-3 and antisense primer 5-AAGACGCUUACUAAUCUGCTT-3),在大鼠MCAO术前24h进行左侧脑室注射(10ul、2μg/μL)。之后再采用Longa线栓法制做大鼠MCAO模型,在再灌注启始时给予RSV处理(腹腔注射、100mg/kg)。⑷用Western blot检测Sham、MCAO、MCAO+DMSO、MCAO+RSV组中Sirt-1、p62、LC3B和NLRP3炎性复合体及其下游炎症分子caspase-1、IL1β、IL18的蛋白表达水平;用TTC染色法检测上述四个分组中脑梗死的体积大小;测定各组样本中脑组织的含水量;对各组大鼠进行神经功能评分。⑸用Western blot检测Sham、MCAO、MCAO+DMSO、MCAO+RSV、MCAO+RSV+3-MA组中Sirt-1、p62、LC3B及NLRP3炎性复合体的蛋白表达水平。⑹用Western blot检测Sham、MCAO、MCAO+DMSO、MCAO+RSV、MCAO+RSV+Sirt1 siRNA组中Sirt-1、p62、LC3B及NLRP3炎性复合体的蛋白表达水平。结果:⑴脑缺血再灌注损伤后,脑皮质中NLRP3炎性复合体及其下游炎性分子caspase-1、IL1β、IL18蛋白表达水平增加;同时,Sirt-1表达水平上调、自噬活性增强(LC3BII/I的比值增大、P62增多)。RSV处理可以明显地抑制NLRP3炎性复合体介导的炎症反应,进一步上调Sirt-1的表达水平、增强自噬活性(LC3BII/I的比值进一步增大、P62减少)。此外,RSV处理还可以显著地减小脑梗死灶体积、降低脑含水量、改善神经功能评分。⑵使用3-MA特异性抑制自噬活性(LC3BII/I的比值减小、P62增多)后,RSV对NLRP3炎性复合体活化的抑制作用被明显阻断,但Sirt-1的蛋白表达水平未受明显影响。⑶使用siRNA特异性干扰Sirt-1的表达后,不仅显著地逆转了RSV对NLRP3炎性复合体活化的抑制作用而且明显地阻断了RSV诱导的自噬活性的增强(LC3BII/I的比值大幅减小、P62大幅增多)。结论:RSV处理可通过增强Sirt-1诱导的自噬活性抑制NLRP3炎性复合体介导的炎症级联反应从而减轻脑缺血再灌注损伤。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R743
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 RSV对脑缺血再灌注损伤的保护作用
    1 实验材料
    2 实验方法
    3 结果
    4 小结
第二部分 RSV对脑缺血再灌注损伤后Sirt-1的表达、自噬活性以及NLRP3炎性复合体活化的影响
    1 实验材料
    2 实验方法
    3 结果
    4 小结
第三部分 RSV通过诱导自噬活性抑制NLRP3炎性复合体的活化
    1 实验材料
    2 实验方法
    3 结果
    4 小结
第四部分 Sirt-1在RSV增强自噬活性并抑制NLRP3炎性复合体活化的过程中具有重要作用
    1 实验材料
    2 实验方法
    3 结果
    4 小结
讨论
总结
参考文献
文献综述
    综述参考文献
致谢
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本文编号：2864110