淋巴毒素beta受体信号通路对神经干细胞分化的影响

发布时间：2020-11-02 20:44

　　 背景:细胞毒素(Lymphotoxin,LT)是一种主要表达于细胞表面的淋巴因子,亚型LTα与一到两个与另一膜相关亚型LTβ结合形成LTα1β2或LTα2β1异源三聚体。其中,占主导地位的LTα1β2主要与表达于内皮细胞、成纤维细胞、上皮细胞、单核细胞和树突状细胞的淋巴毒素β受体(LTβR)相结合。过去对于LTβR信号通路的相关研究主要局限于淋巴组织器官的形成与发展。但是,对于其在神经系统中,特别是神经发生(neurogenesis)中的作用还是未知的。在本实验中,我们将探究并揭示LTβR是否是调节信号通路对神经干细胞神经发生的分化的作用。方法:1.应用C57BL/6J野生型与GFAP-dnIκBα转基因型小鼠,分别于胚胎期与成熟期小鼠大脑中分离出原代神经干细胞成球培养,首次传代后行单层细胞培养、扩增及传代。2.应用腺病毒调节的NFκB-萤火虫荧光素酶报告基因试验与p65/RelB/p52核转位试验实现NFκB的激活。3.运用实时定量聚合酶链式反应(quantitative RT-PCR)评估LTβR信使RNA的表达。4.运用免疫组织化学法与蛋白质印迹法评估LTβR蛋白的表达。5.使用荧光共焦显微镜观察多标记免疫细胞化学法处理后的神经干细胞分化情况并拍照记录以备数据分析。6.应用Graphpad Prism软件绘图并数据分析。结果:在培养的神经干细胞/神经祖细胞中,经LTα1β2作用后可同时激活NFκB经典与非经典信号通路。并且,在小鼠大脑中已确立的神经源性区域内也被检测到具有类似LTβR免疫活性的GFAP+/Sox2+神经干细胞。同时,运用实时定量聚合酶链式反应与蛋白质印迹法也证实了LTβR分别表达于体外培养的神经干细胞/神经祖细胞与小鼠大脑神经源性区域内。不难看出,LTβR的表达与神经细胞的分化关系十分密切。在体外培养实验中,经LTα1β2作用的野生型神经干/祖细胞会更倾向于向星形胶质细胞系和少突胶质细胞系分化,而抑制了其向神经元分化。而对于GFAP-dn IκBα转基因小鼠提取的神经干/祖细胞,由于表达GFAP的神经细胞,即星形胶质细胞,NFκB信号通路并不能被激活,其分化倾向也随之有所不同。结论:本实验第一次揭露了淋巴毒素β受体信号通路在神经干/祖细胞的表达与功能。激活LTβR信号通路可以增强胶质细胞系的分化。同时,本实验的实验结果也证实了获得性免疫反应与炎症反应都具有调节神经再生的功能。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R741
【文章目录】：
英汉缩略语名词对照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 淋巴毒素α1β2在神经干/祖细胞中通过经典和非经典通路激活NFκB信号通路
    1 材料
    2 方法
    3 结果
第二部分 淋巴毒素β受体分别存在于体内和体外培养的神经干细胞
    1 材料
    2 方法
    3 结果
第三部分 淋巴毒素α1β2抑制神经干细胞向神经元分化促进向胶质细胞分化
    1 材料
    2 方法
    3 结果
第四部分 胶质细胞NFκB被阻断后的分化情况
    1 材料
    2 方法
    3 结果
讨论
结论
    补充材料
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
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本文编号：2867547