Toll样受体4在脑胶质瘤细胞中的表达及其作用研究

发布时间：2017-04-05 21:11

  本文关键词：Toll样受体4在脑胶质瘤细胞中的表达及其作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究拟检测TLR4在胶质瘤细胞中的表达,探讨TLR4对胶质瘤细胞生物学活性的影响。方法:1采用RT-PCR方法检测胶质瘤细胞株U251-MG中TLR4的m RNA表达情况。2采用Western Blot方法检测U251-MG细胞中TLR4的蛋白表达情况。3构建TLR4 si RNA重组质粒,转染至U251-MG细胞。采用RT-PCR方法检测基因转染后U251-MG细胞中TLR4的m RNA表达情况。4采用Western Blot方法检测基因转染后U251-MG细胞中TLR4的蛋白表达情况。5采用流式细胞分析技术检测TLR4基因沉默前后对胶质瘤细胞周期的影响。6采用MTT实验检测TLR4基因沉默前后胶质瘤细胞的增殖活性。7采用ELISA法检测TLR4基因表达沉默前后胶质瘤细胞培养上清中IL-6、IL-10和VEGF含量变化。结果:1 RT-PCR实验结果显示,在胶质瘤细胞U251-MG中可检测到TLR4m RNA表达。2 Western Blot实验结果显示,在胶质瘤细胞U251-MG中可检测到TLR4蛋白表达。3将TLR4 si RNA重组质粒转染U251-MG细胞后,检测TLR4的m RNA表达情况,结果显示,转染TLR4 si RNA质粒24h后,U251-MG细胞中TLR4 m RNA表达水平(0.138±0.0004)比转染空载体组(1.003±0.0005)、未转染组(1.034±0.0006)显著降低(P0.01)。转染空载体组与未转染组之间差异无统计学意义。4将TLR4 si RNA重组质粒转染U251-MG细胞后,检测TLR4的蛋白表达情况,结果显示,与转染空载体组(0.900±0.0062)、未转染组(1.007±0.0029)相比,转染TLR4 si RNA基因24h后,U251-MG细胞中TLR4蛋白表达水平(0.200±0.0042)显著降低(P0.05)。转染空载体组与未转染组之间差异无统计学意义。5流式细胞分析结果显示,未转染、转染空载体和转染TLR4 si RNA的U251-MG细胞,经10μg/ml LPS作用48h,与未经LPS作用时相比,三组细胞S期细胞比例均明显增高,G0/G1期细胞比例下降(P0.05);在LPS刺激情况下,转染TLR4 si RNA组细胞与未转染组和转染空载体组细胞相比,S期细胞比例显著降低,G0/G1期细胞比例增高(P0.05)。6 MTT实验结果显示,经10μg/ml LPS刺激后,与未转染组和转染空载体组相比,转染TLR4 si RNA组细胞增殖率显著降低(P0.05)。7 ELISA实验结果显示,经10μg/ml LPS作用12h后,与未转染组和转染空载体组相比,转染TLR4 si RNA组U251-MG细胞分泌IL-6,IL-10,VEGF的含量明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:胶质瘤细胞U251-MG表达TLR4,沉默TLR4基因表达可抑制LPS诱导的肿瘤细胞增殖和细胞因子分泌。
【关键词】：胶质瘤 Toll样受体4 基因沉默 转染
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文缩写8-9
• 前言9-10
• 材料与方法10-21
• 结果21-23
• 附图23-26
• 附表26-27
• 讨论27-30
• 结论30
• 参考文献30-34
• 综述Toll样受体4与恶性肿瘤的研究进展34-41
• 参考文献38-41
• 致谢41-42
• 个人简历42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 农文政;杜萍;甘精华;黄丽珍;;宫颈癌中白细胞介素-10、白细胞介素-12检测及其意义[J];右江医学;2011年01期

2 易翔;唐安洲;覃颖;;鼻咽癌中白细胞介素-10、白细胞介素-12检测及其意义[J];中国现代医药杂志;2009年08期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 孙巧玲;TLR4促进肿瘤细胞免疫逃逸和凋亡抵抗的分子机制研究[D];浙江大学;2008年

  本文关键词：Toll样受体4在脑胶质瘤细胞中的表达及其作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：287696