血清外泌体中miR-155与儿童癫痫的相关性研究

发布时间：2020-11-10 11:07

　　 背景癫痫是儿童最为常见的神经系统疾病之一。据世界卫生组织公布,在全球范围内,每年约有240万人被诊断为癫痫,其中约2/3为儿童。目前诊断癫痫主要依靠临床病史、脑电图和脑成像,但患儿及家属提供的病史一般不够详尽,一般脑电图捕捉到痫性放电波的可能性较低,除非行持续的视频脑电图监测,许多癫痫患者的脑成像是阴性的,这些因素均会导致癫痫诊断错误或延迟。因此寻找一种客观、准确的生物标志物来诊断儿童癫痫是一项急需解决的问题。与癫痫有关的生物标志物主要是电生理、影像学与分子,在这几种类型中,分子生物标志物特别有吸引力,因为它们提供了快速、简单和廉价的床边检测的可能性。许多研究表明miRNA作为一种新兴的脑部疾病生物标志物参与了癫痫的发生发展。外泌体作为一种新型的细胞间通讯工具,其不仅能够介导miRNA的转运,且能够自由通过血脑屏障。由于外泌体脂质双层膜的保护,miRNA能够进行长时间、长距离的运输而不被内源性核糖核酸酶降解。近年来,外泌体miRNA作为生物标志物在许多中枢神经系统疾病的很高的诊断价值,如阿尔兹海默病及帕金森。阅读相关文献,我们选择在动物癫痫模型和癫痫患者血清中均明显上调的微小RNA-155(miR-155)作为研究目标。通过提取癫痫患儿及健康儿童血清中的外泌体,对比血清外泌体中miR-155在癫痫儿童及健康儿童的差异性表达,从而为癫痫的诊断提供一种潜在的生物标志物。目的对比血清外泌体中miR-155在癫痫儿童与健康儿童的表达差异,探讨血清外泌体中miR-155对儿童癫痫的诊断价值。方法收集2017年10月至2018年10月在郑州大学第一附属医院收治的首次确诊为癫痫的患儿30例入组癫痫组,选取性别与年龄与癫痫组匹配的同期在本院体检的健康儿童30例入组健康对照组。应用超速离心法提取血清中的外泌体,应用透射电子显微镜、纳米粒径跟踪分析仪、Western Blot鉴定外泌体,利用Nanodrop对RNA的纯度进行测试。运用实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR)检测miR-155在癫痫患儿血清外泌体、去除外泌体的血清悬浮液及健康儿童外泌体中的表达情况,使用SPSS24.0软件对其表达差异进行统计学分析,P0.05认为差异有统计学意义。随后制作出受试者工作特性曲线(ROC曲线):对差异表达的miR-155进行ROC曲线分析,以评价血清外泌体中非编码miR-155对诊断儿童癫痫的可能性。结果1.透射电镜及纳米粒径跟踪分析仪方法鉴定血清中的外泌体,能够检测到直径为30-100nm的微囊泡,且Western Blot能够检测到外泌体标记蛋白CD63、CD9的表达。2.与健康对照组对比,癫痫组血清外泌体miR-155明显上调,差异具有统计学意义(t=4.783,P0.05)。3.通过比较癫痫组提取的外泌体中与去除外泌体的血清悬浮液中的miR-155的含量,miR-155在外泌体中比去除外泌体的血清悬浮液明显上调,差异具有统计学意义(P0.05)。4.癫痫组血清外泌体miR-155的曲线下面积为AUC值为0.811,特异度为70%,敏感度为83.3%,截断值为1.49。结论1.本研究应用超速离心法能成功从血清中提取到外泌体。2.本研究表明miR-155在癫痫组血清外泌体中的表达水平明显高于健康对照组,推测外泌体miR-155可能参与了癫痫的发病机制。3.本研究表明miR-155在外泌体中比去除外泌体的血清悬浮液高,外泌体miR-155可能对癫痫更具有诊断价值。4.本研究表明当血清外泌体miR-155的表达水平大于1.49时,提示可能患有癫痫。
【学位单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R742.1
【部分图文】：

清外泌体电子透射显微镜形态图 图 2.单个血清外泌体电子透射显得到的外泌体用透射电子显微镜进行扫描，结果如图 1 和图 2 所示圆形及杯状的 50-100nm 小囊泡，图 2 可清晰看见外泌体表面的磷nm 时外泌体结构可清晰观察到，内部为低电子密度物质。这与文献征一致[40]。粒径跟踪分析仪（Nanoparticle tracking analysis

图 1 多个血清外泌体电子透射显微镜形态图 图 2.单个血清外泌体电子透射显微镜形态图将离心得到的外泌体用透射电子显微镜进行扫描，结果如图 1 和图 2 所示，外泌体是呈圆形、类圆形及杯状的 50-100nm 小囊泡，图 2 可清晰看见外泌体表面的磷脂双分子层。标尺在 100nm 时外泌体结构可清晰观察到，内部为低电子密度物质。这与文献报道的外泌体的形态特征一致[40]。2 纳米粒径跟踪分析仪（Nanoparticle tracking analysis NTA）检测结果

图 1 多个血清外泌体电子透射显微镜形态图 图 2.单个血清外泌体电子透射显微镜形态图将离心得到的外泌体用透射电子显微镜进行扫描，结果如图 1 和图 2 所示，外泌体是呈圆形、类圆形及杯状的 50-100nm 小囊泡，图 2 可清晰看见外泌体表面的磷脂双分子层。标尺在 100nm 时外泌体结构可清晰观察到，内部为低电子密度物质。这与文献报道的外泌体的形态特征一致[40]。2 纳米粒径跟踪分析仪（Nanoparticle tracking analysis NTA）检测结果
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本文编号：2877857