肾脑复元汤联合NSCs移植对MCAO大鼠Caspase-3、Caspase-9的影响

发布时间：2020-11-21 03:17

　　 目的:探讨肾脑复元汤联合NSCs移植对MCAO大鼠Caspase-3、Caspase-9的影响。方法:选用健康雄性清洁级SD大鼠200只,体重250±50g,适应性喂养一周后,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉梗阻模型(MCAO),除假手术组(单纯手术而未插线动物,灌胃等体积的蒸馏水)外,予造模成功后采用随机数字表法分为模型组(行MCAO术,灌胃等体积的蒸馏水)、中药组(行MCAO术,灌胃等体积肾脑复元汤)、联合组(行MCAO术,将1×105个胎鼠NSCs与5ul PBS液混悬后采用侧脑室途径注入缺血侧侧脑室,灌胃等体积肾脑复元汤),各组每个时间点保证成功6只实验动物,均在每天各灌胃1次,直到处死。以上四组分别于造模成功给药后1d、3d、7d后处死取脑组织,通过TTC染色测定脑梗死面积,通过WB和免疫组化测定脑组织Caspase-3、Caspase-9表达,并于造模后2h及处死前采用m-NSS进行神经功能缺损评分(各组评分3次,取平均值纳入结果)。结果:1.神经功能评分除假手术组外,各组神经功能缺损评分在各时间点与治疗前相比均有下降,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。中药组、联合组各时间点较模型组神经功能缺损评分明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01。联合组神经功能缺损评分降低的幅度比中药组更明显(P0.01)。2.脑梗死面积百分比测定除假手术组外,各组脑梗死面积百分比前三天呈升高趋势,三天后逐渐下降。同时间点比较:脑梗死面积百分比测定中药组低于模型组(P0.05),联合组低于模型组(P0.01),中药组低于联合组(P0.05)。3.免疫组化检测结果显示假手术组各时间点Caspase-3、Caspase-9表达显著低于模型组(P0.01),说明造模对大鼠脑组织造成了损害。其余各组表达在1-3天呈上升趋势,3-7d呈下降趋势,其中第三天表达最高,考虑与梗死后继发脑组织水肿有关。同时间点比较,中药组均低于模型组(P0.01),联合组均低于模型组(P0.01),联合组均低于中药组(P0.01)。说明中药组与联合组均能抑制Caspase-3、Caspase-9的表达,其中联合组的作用更明显。4.WB检测假手术组各时间点与模型组相比,仅表达少量Caspase-3、Caspase-9(P0.01),提示造模成功,MCAO术引起大鼠脑组织大量神经元凋亡。其余各组在第三天出现表达峰值,前三天的上升趋势和三天后的下降趋势与免疫组化检测结果总体相符。同时间点比较,中药组、联合组的表达均低于模型组(P0.01),中药组联合组相比,联合组表达均更低(P0.01),说明肾脑复元汤及肾脑复元汤联合NSCs移植均能抑制Caspase-3、Caspase-9的表达,且二者联用降低Caspase-3、Caspase-9的效果更好。结论:肾脑复元联合NSCs移植治疗可改善MCAO大鼠神经功能缺损评分、减少MCAO大鼠脑梗死体积,抑制脑梗死后MCAO大鼠Caspase-3、Caspase-9表达,其效果优于单用肾脑复元汤治疗。
【学位单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R743.3
【部分图文】：

可发现大量细胞沉积。1ml/100ul 枪头轻轻吸除上清液。以 1ml 常温 PBS 清洗细胞团块，清洗 3 次。加入形成单细胞悬液，吸取 10ul 加入血球板细胞计数，最终以孔板，置于 CO2 培养箱(CO2:空气=5%:95%，相对湿度 10液一次。NSCs 的鉴定第 2 代 NSCs 球贴壁后进行 Nestin 蛋白的免疫荧光检测，结白 Nestin 表达呈强阳性，DAPI 细胞核染色呈蓝色，荧光，证实该方法培养能够培养出高纯度 NSCs。见图 1。

天达到最高值，随后呈下降趋势，这可能与脑同时间点组间比较，脑梗死体积联合组＜中药，差异有统计学意义。说明肾脑复元汤能减少治疗作用。且联合神经干细胞移植治疗比单纯表 4 大鼠脑梗死体积比较（%，x例数梗死体积1d 3d 6 0.00±0.00** 0.00±0.00** 6 45.23±4.25 50.38±4.80 6 41.02±2.80*# 45.06±2.76*# 6 35.80±1.83** 39.04±2.19** 型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与联合组比假手术组 模型组 中药组 联合组

ase-9：假手术组各时间点，对比模型组，仅表达少量 Caspase成功，MCAO 术后大鼠脑组织内神经元凋亡增多，使 Cas三组 Caspase-9 表达在第三天达到最高峰，考虑与梗死后继关。同时间点组间比较联合组＜中药组＜模型组（P＜0.01合 NSCs 移植能降低脑梗死后大鼠脑组织内 Caspase-9 表达复元汤治疗。表 5 免疫组化法检测 Caspase-3 表达-3 假手术组 模型组 中药组 0.18±0.01**0.59±0.04 0.39±0.03**##00.20±0.01**0.72±0.06 0.51±0.04**##00.19±0.01**0.47±0.04 0.32±0.02**##0型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与联合组比较，#P＜0.05第 1 天 第 3 天 第 7
【参考文献】

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本文编号：2892439