NLRP3炎性小体在大鼠癫痫持续状态模型中的表达及作用机制研究

发布时间：2017-04-07 14:03

  本文关键词：NLRP3炎性小体在大鼠癫痫持续状态模型中的表达及作用机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)是医学上的危急重症之一,可导致中枢神经系统急性和持久性损害,尤其是海马等边缘系统神经元的损伤。研究证实,脑部炎症能够增加神经元兴奋性,降低癫痫发作阈值,而且很可能参与癫痫发作的分子,结构和突触的变化。NLRP3炎性小体的激活能够引起炎性因子IL-1β、IL-18的成熟及释放,在中枢神经系统固有免疫中发挥重要作用。但它在癫痫的发生发展过程中所起的作用,至今未见报道。方法我们通过杏仁核点燃制作SD大鼠SE模型,检测大鼠海马IL-1β,Caspase-1和NLRP3的动态表达,并观察NLRP3在海马小胶质细胞中是否表达。为进一步验证NLRP3炎性小体的激活是否能够引起SE相关的神经损害,我们经第三脑室内分别泵入人工脑脊液,control si RNA,NLRP3 si RNA,或Caspase-1 si RNA预处理后,观察相应的SE大鼠海马IL-1β,IL-18和Caspase-1表达变化,海马神经元死亡存活情况以及自发性反复发作的改变。结果与对照组相比,IL-1β和NLRP3炎性小体组分的表达水平在SE诱发成功后的3小时开始上升,并在12小时达到高峰。敲除NLRP3或Caspase-1基因能够使IL-1β和IL-18在SE诱发成功后12小时的高峰表达水平得到下调,能够明显延缓癫痫发生并减弱癫痫自发性反复发作的严重程度。另外,敲除NLRP3或Caspase-1基因能够显著减少SE大鼠诱发成功后6周的海马CA1和CA3区的神经元死亡。结论本研究首次证实NLRP3炎性小体在大鼠癫痫持续状态模型中的海马表达上调,并且进一步验证敲除NLRP3炎性小体后对SE大鼠有神经保护作用。NLRP3炎性小体有可能成为潜在的新的癫痫发作治疗的靶点。
【关键词】：NLRP3 炎性小体 癫痫持续状态 细胞因子 IL-1β
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.1;R-332
【目录】：

• 摘要2-3
• ABSTRACT3-6
• 引言6-7
• 第一章 材料与方法7-14
• 1.1 实验动物7
• 1.2 主要仪器、试剂和抗体7-9
• 1.2.1 主要仪器7
• 1.2.2 主要试剂7-8
• 1.2.3 主要抗体8
• 1.2.4 常用液体的配制8-9
• 1.3 实验方法9-13
• 1.3.1 RNA转染技术敲除大鼠NLRP3及caspase-19
• 1.3.2 大鼠杏仁核电刺激SE模型的制备9-10
• 1.3.3 SRS的视频监测10
• 1.3.4 脑组织样本准备10
• 1.3.5 免疫蛋白印记( Western blot) 检测海马内蛋白表达10-11
• 1.3.6 RT-PCR检测大鼠海马的NLＲP3和caspase-1 的mRNA水平11
• 1.3.7 ELISA法检测癫痫大鼠海马组织中IL-1β和IL-18的含量11-12
• 1.3.8 海马神经元细胞尼氏染色法12
• 1.3.9 海马神经元细胞TUNEL染色法12
• 1.3.10 免疫荧光12
• 1.3.11 动物分组12-13
• 1.4 统计学处理13-14
• 第二章 结果14-22
• 2.1 SE大鼠海马组织Cleaved IL-1β, NLRP3和cleaved caspase-1 等蛋白表达升高14-15
• 2.2 运用非病毒RNA转染技术敲除NLRP3基因降低SE大鼠海马组织的炎症细胞因子和cleaved caspase-1 的表达15-17
• 2.3 运用非病毒RNA转染技术敲除NLRP3基因缓解大鼠SE后自发性反复发作的发展和严重程度17-18
• 2.4 运用非病毒RNA转染技术敲除NLRP3基因减少海马神经元的丢失18-20
• 2.5 运用非病毒RNA转染技术敲除caspase-1 基因缓解神经炎症，SE后自发性反复发作和海马神经元丢失20-22
• 第三章 讨论22-24
• 结论24-25
• 参考文献25-28
• 综述28-35
• 综述的参考文献32-35
• 攻读学位期间的研究成果35-37
• 致谢37-38

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