间充质干细胞对小胶质细胞吞噬Aβ和炎症反应的影响及机制研究
发布时间：2020-12-11 04:55
背景神经系统疾病包括阿尔兹海默症、帕金森综合征等,神经系统疾病的发病率逐年增高,目前尚未出现有效的治疗手段。小胶质细胞作为一种免疫效应细胞,在神经系统疾病的发生与发展中都发挥着重要作用。间充质干细胞具有免疫调节功能,研究发现,间充质干细胞对于神经系统疾病具有一定的治疗作用,但是具体机制并不明确。研究间充质干细胞对小胶质细胞的功能及其介导的神经炎症的影响与作用机制,将为干细胞应用于神经系统相关疾病的临床治疗提供理论基础。目的1.研究间充质干细胞（MSC）对小胶质细胞吞噬Aβ的影响及机制;2.研究间充质干细胞对LPS刺激的小胶质细胞介导的神经炎症的影响。方法1.利用Aβ刺激小胶质细胞并通过MSC条件培养基处理,研究MSC对小胶质细胞吞噬Aβ的影响。分别通过CCK-8、PI染色、AnnexinV染色检测小胶质细胞活力、周期与凋亡情况;并通过荧光标记检测小胶质细胞对Aβ的吞噬情况,通过Western blot检测小胶质细胞中Aβ降解酶以及自噬相关蛋白的表达。2.利用LPS刺激小胶质细胞并通过MSC条件培养基处理,研究MSC对体外培养的小胶质细胞炎症反应的影响。利用腹腔内注射LPS的方法建立小鼠...
【文章来源】：新乡医学院河南省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
β和/或UCMSCs-CM对BV2细胞活性的影响
图 4 .UCMSCs-CM 增强了 BV2 细胞的 Aβ25–35 吞噬图注：A.BV2 细胞用 UCMSCs-CM 培养 24 小时, 然后加入 Fluor Aβ2 小时后, 用 D对细胞进行 10 分钟的染色, 并使用激光扫描共聚焦显微镜进行观察 BV2 细胞中 Aβ 吞情况(绿色)。箭头处表示 BV2 细胞细胞质中的 Aβ。刻度杆= 50μm。B. Aβ 阳性 BV2胞比例的直方图分析。数据代表至少三个独立的实验，并以平均值±标准差表示。###0.001，以 BV2 + Aβ 组为对照组。Fig. 4 UCMSCs-CM enhances Aβ25–35 phagocytosis by BV2 cells.Note: A. BV2 cells were incubated wit h ucMSCs-CM for 24 h followed by addition of HiLFluor 488-labeled β-Amyloid 25–35 (Fluor-Aβ25–35) oligomers. After 2 h, cells were stainDAPI for 10 min and examined using laser scanning confocal microscopy.Confocal microscintracellular Fluor-Aβ25–35 (green) in BV2 cells. Arrows indicate BV2 cells phagocytosingAβ25–35 in the cytoplasm. Scale bar =50μm. B. Histogram analysis of the ratio of Fluor-Aβpositive BV2 cells. The data were indicated as the mean ± SD. ###P < 0.001, as compared t
2.5 UCMSCs-CM 能够促进 Aβ 刺激下 BV2 细胞中 Aβ-降解酶的表达胰岛素降解酶 (IDE) 和尼普利菌素 (Nep) 是小胶质细胞中表达的Aβ降解酶[70]。为了研究 UCMSCs-CM 是否影响小胶质细胞中 Nepe 和 IDE 的表达, 用 UCMSCs-CM 和/或 Aβ作用于 BV2 细胞 24小时, 用Western-blot检测Nep 和 IDE 的表达。结果显示，与对照组相比, UCMSCs-CM 和 Aβ 单独作用于 BV2 均不影响 IDE 的表达量, 但 UCMSCs-CM和Aβ共同作用于BV2细胞,IDE的表达量显著增加 (图 5B)。而无论 Aβ 存在与否,UCMSCs-CM 都显著增加了 Nep 的表达 (图 5C)。这些结果表明, 在 Aβ25-35 刺激的情况下, UCMSCs-CM 促进了 IDE 和 Nep 在 BV2 细胞中的表达。
【参考文献】：
期刊论文
[1]与阿尔茨海默病密切相关的α-,β-和γ-分泌酶的研究进展[J]. 马波,张建军. 国外医学.药学分册. 2005(01)
本文编号：2909939
【文章来源】：新乡医学院河南省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
β和/或UCMSCs-CM对BV2细胞活性的影响
图 4 .UCMSCs-CM 增强了 BV2 细胞的 Aβ25–35 吞噬图注：A.BV2 细胞用 UCMSCs-CM 培养 24 小时, 然后加入 Fluor Aβ2 小时后, 用 D对细胞进行 10 分钟的染色, 并使用激光扫描共聚焦显微镜进行观察 BV2 细胞中 Aβ 吞情况(绿色)。箭头处表示 BV2 细胞细胞质中的 Aβ。刻度杆= 50μm。B. Aβ 阳性 BV2胞比例的直方图分析。数据代表至少三个独立的实验，并以平均值±标准差表示。###0.001，以 BV2 + Aβ 组为对照组。Fig. 4 UCMSCs-CM enhances Aβ25–35 phagocytosis by BV2 cells.Note: A. BV2 cells were incubated wit h ucMSCs-CM for 24 h followed by addition of HiLFluor 488-labeled β-Amyloid 25–35 (Fluor-Aβ25–35) oligomers. After 2 h, cells were stainDAPI for 10 min and examined using laser scanning confocal microscopy.Confocal microscintracellular Fluor-Aβ25–35 (green) in BV2 cells. Arrows indicate BV2 cells phagocytosingAβ25–35 in the cytoplasm. Scale bar =50μm. B. Histogram analysis of the ratio of Fluor-Aβpositive BV2 cells. The data were indicated as the mean ± SD. ###P < 0.001, as compared t
2.5 UCMSCs-CM 能够促进 Aβ 刺激下 BV2 细胞中 Aβ-降解酶的表达胰岛素降解酶 (IDE) 和尼普利菌素 (Nep) 是小胶质细胞中表达的Aβ降解酶[70]。为了研究 UCMSCs-CM 是否影响小胶质细胞中 Nepe 和 IDE 的表达, 用 UCMSCs-CM 和/或 Aβ作用于 BV2 细胞 24小时, 用Western-blot检测Nep 和 IDE 的表达。结果显示，与对照组相比, UCMSCs-CM 和 Aβ 单独作用于 BV2 均不影响 IDE 的表达量, 但 UCMSCs-CM和Aβ共同作用于BV2细胞,IDE的表达量显著增加 (图 5B)。而无论 Aβ 存在与否,UCMSCs-CM 都显著增加了 Nep 的表达 (图 5C)。这些结果表明, 在 Aβ25-35 刺激的情况下, UCMSCs-CM 促进了 IDE 和 Nep 在 BV2 细胞中的表达。
【参考文献】：
期刊论文
[1]与阿尔茨海默病密切相关的α-,β-和γ-分泌酶的研究进展[J]. 马波,张建军. 国外医学.药学分册. 2005(01)
本文编号：2909939
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