HCMV感染巨噬细胞对恶性胶质瘤细胞侵袭的影响

发布时间：2017-04-08 19:42

  本文关键词：HCMV感染巨噬细胞对恶性胶质瘤细胞侵袭的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)属于疱疹病毒β亚科,是导致中枢神经系统先天性异常的最重要病原体之一。HCMV在人群中感染非常普遍,我国成人感染率大于90%。越来越多的研究显示,HCMV感染与肿瘤之间存在密切联系,在多种肿瘤组织如脑胶质瘤、结肠癌等中都可检测到HCMV的基因及蛋白。本研究组前期的实验证明了HCMV对胶质瘤的发生发展起到影响。为进一步了解HCMV感染与胶质瘤之间的作用机制,以佛波酯为诱导剂诱导THP-1单核细胞成为巨噬细胞,建立了THP-1源性巨噬细胞模型。以RT-PCR检测HCMV即刻早期基因(IE)及晚期基因(UL99)的表达,结果显示巨噬细胞可完整表达IE及UL99。利用酶联免疫吸附测定(ELISA)对巨噬细胞感染HCMV后的表皮生长因子(EGF)进行检测,发现HCMV可促进巨噬细胞EGF的分泌。共培养巨噬细胞与U87细胞,HCMV感染巨噬细胞后以Western-blot检测U87细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达变化,结果表明HCMV感染巨噬细胞组的U87细胞EGFR表达量高于对照组(p0.05),HCMV感染巨噬细胞可上调U87细胞EGFR的表达。利用Transwell体外侵袭实验检测HCMV感染的巨噬细胞对U87侵袭能力的影响,结果显示HCMV感染组侵袭到小室膜下的细胞数量高于未感染组(p0.05),HCMV感染巨噬细胞可促进U87细胞的侵袭。再以Western-blot检测局部黏着斑激酶(FAK)及Tyr397 FAK,结果表明HCMV感染组Tyr397 FAK蛋白相对表达量高于对照组(p0.05),HCMV感染可上调FAK的磷酸化。本研究分析了HCMV感染的巨噬细胞对胶质瘤恶性行为的影响,这为进一步阐释HCMV感染的分子机制及HCMV感染与肿瘤之间的关系奠定了理论基础。
【关键词】：人巨细胞病毒 恶性神经胶质瘤 巨噬细胞 细胞侵袭
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-7
• 引言7-9
• 第一章 实验材料9-13
• 1.1 细胞9
• 1.2 病毒9
• 1.3 主要试验仪器设备9-13
• 1.3.1 主要实验试剂及其配制方法10
• 1.3.2 主要实验试剂10-11
• 1.3.3 主要试剂配制11-13
• 第二章 实验方法13-23
• 2.1 U87细胞的培养13-14
• 2.1.1 细胞复苏13
• 2.1.2 细胞传代13-14
• 2.1.3 细胞冻存14
• 2.2 HCMV株毒种的制备和定量14-15
• 2.2.1 HCMV株毒种的制备14
• 2.2.2 病毒感染滴度的测定（空斑定量）14-15
• 2.3 巨噬细胞的诱导15-16
• 2.3.1 THP-1 细胞的培养及传代方法15
• 2.3.2 THP-1 细胞诱导成为巨噬细胞15-16
• 2.4 RT-PCR检测HCMV IE、UL99基因在THP-1细胞、巨噬细胞、HELF中的表达16-18
• 2.5 ELISA检测HCMV感染对巨噬细胞EGF的影响18-19
• 2.6 Western-blot检测HCMV感染巨噬细胞对U87细胞EGFR表达的影响19-21
• 2.7 Transwell检测HCMV感染巨噬细胞对U87细胞侵袭的影响21
• 2.8 Western-blot检测HCMV感染对U87细胞FAK、Tyr397 FAK蛋白表达的影响21-22
• 2.9 统计学分析22-23
• 第三章 实验结果23-30
• 3.1 细胞培养23-24
• 3.2 巨噬细胞的诱导24
• 3.3 HCMV毒株的扩增24-25
• 3.4 RT-PCR检测HCMV IE、UL99基因在THP-1细胞、巨噬细胞、HELF中的表达25-26
• 3.5 HCMV感染促进巨噬细胞EGF的表达与分泌26-27
• 3.6 HCMV感染巨噬细胞促进U87细胞EGFR的表达27-28
• 3.7 HCMV感染巨噬细胞增加U87细胞的侵袭能力28-29
• 3.8 HCMV感染对U87细胞FAK、Tyr397 FAK表达的影响29-30
• 第四章 讨论30-32
• 第五章 结论32-33
• 参考文献33-36
• 文献综述 人巨细胞病毒感染在单核巨噬细胞中的调控作用36-47
• 综述参考文献43-47
• 攻读学位期间研究成果47-48
• 致谢48-49

  本文关键词：HCMV感染巨噬细胞对恶性胶质瘤细胞侵袭的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：293577