P190与ATP1B3互作调控Na + /K + -ATP酶在脑微血管内皮细胞的膜定位
发布时间：2020-12-26 16:34
目的:血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）是脑内一种生理性屏障,能够调节离子和分子进出脑实质,维持中枢神经系统的稳定。BBB主要是由脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells,BMECs）、基底膜、星型胶质细胞的伪足以及周细胞组成。BMECs是构成血脑屏障的主要组成细胞,区别于其它组织的内皮细胞,BMECs具有紧密连接、黏附连接及低水平的胞吞胞吐的特性,这些特性限制了血液中小分子通过跨细胞和细胞间的运输穿过BBB进入脑内。BMECs膜表面也具有多种底物特异性的运输系统,能够转运离子,细胞代谢产物和特异性小分子。例如,定位于BMECs腔面的钠钾泵（也称Na+/K+-ATP酶）可以调节细胞中的钠离子进入脑间隙液中,同时将脑内钾离子泵入细胞中。P190是一种分子量为190KD的跨膜蛋白,最初发现其存在于有髓神经纤维郎飞节的节旁区。本实验室前期工作首次发现,P190在人脑微血管内皮细胞（HBMEC）的血管腔面表达,作为受体参与细菌侵袭并穿过BBB导致新生儿细菌性脑膜炎发生（Nat...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
ATP1B3全长及糖基化位点突变的引物设计原理和位点位置图
中国医科大学博士学位论文3 结果190-C 末端结构域（P190C）能够与 ATP1B3 相结合 2 所示：经体外翻译（TNT）得到带有 His 标签的 ATP1B3 和外纯化的带有 GST 标签的 P190 C 末端结构域融合蛋白孵育），GST-pull down 实验分析蛋白间的相互作用。结果显示 P ATP1B3 之间存在相互作用（图 2 *所示位置）；而 HBMEC 表e β1（ATP1B1）不能够与 P190 C 末端结构域结合。以上结果构域与 ATP1B3 的结合是特异性的。
图 3：免疫荧光检测 HBMEC 细胞内 P190 与 ATP1B3 的分布情况。培养好HBMEC 经甲醛固定后，利用 anti-P190 和 anti-ATP1B3 抗体对细胞进行染色，荧光二抗（红色是 P190,绿色是 ATP1B3）和 DAPI 复染后，激光共聚焦显微镜 Z轴连续扫描获得图像，分析两种蛋白的在 HBMEC 中的分布情况；散点图和共定位系数分析两蛋白的共定位。标尺：20μm。3.3 P190 定位在 HBMEC 的内质网上HBMEC 中，利用内质网示踪剂标记细胞的内质网，免疫荧光检测 P190 在细胞中内质网的分布情况，结果如图 4 所示：HBMEC 中 P190 与内质网的示踪剂存在共定位（黄色显示区域），说明 P190 主要分布在细胞的内质网中。
【参考文献】：
期刊论文
[1]血脑屏障机制对中枢神经系统诊疗的意义[J]. 宋梓赫,张燕. 世界最新医学信息文摘. 2019(12)
[2]Structure and function of the contactin-associated protein family in myelinated axons and their relationship with nerve diseases[J]. Yan Zou,Wei-feng Zhang,Hai-ying Liu,Xia Li,Xing Zhang,Xiao-fang Ma,Yang Sun,Shi-yi Jiang,Quan-hong Ma,De-en Xu. Neural Regeneration Research. 2017(09)
[3]Gene expression profile of amyloid beta protein-injected mouse model for Alzheimer disease[J]. Ling-na KONG, Ping-ping ZUO~1, Liang MU, Yan-yong LIU, Nan YANG Department of Pharmacology, School of Basic Medicine, Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100005, China. Acta Pharmacologica Sinica. 2005(06)
本文编号：2940066
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
ATP1B3全长及糖基化位点突变的引物设计原理和位点位置图
中国医科大学博士学位论文3 结果190-C 末端结构域（P190C）能够与 ATP1B3 相结合 2 所示：经体外翻译（TNT）得到带有 His 标签的 ATP1B3 和外纯化的带有 GST 标签的 P190 C 末端结构域融合蛋白孵育），GST-pull down 实验分析蛋白间的相互作用。结果显示 P ATP1B3 之间存在相互作用（图 2 *所示位置）；而 HBMEC 表e β1（ATP1B1）不能够与 P190 C 末端结构域结合。以上结果构域与 ATP1B3 的结合是特异性的。
图 3：免疫荧光检测 HBMEC 细胞内 P190 与 ATP1B3 的分布情况。培养好HBMEC 经甲醛固定后，利用 anti-P190 和 anti-ATP1B3 抗体对细胞进行染色，荧光二抗（红色是 P190,绿色是 ATP1B3）和 DAPI 复染后，激光共聚焦显微镜 Z轴连续扫描获得图像，分析两种蛋白的在 HBMEC 中的分布情况；散点图和共定位系数分析两蛋白的共定位。标尺：20μm。3.3 P190 定位在 HBMEC 的内质网上HBMEC 中，利用内质网示踪剂标记细胞的内质网，免疫荧光检测 P190 在细胞中内质网的分布情况，结果如图 4 所示：HBMEC 中 P190 与内质网的示踪剂存在共定位（黄色显示区域），说明 P190 主要分布在细胞的内质网中。
【参考文献】：
期刊论文
[1]血脑屏障机制对中枢神经系统诊疗的意义[J]. 宋梓赫,张燕. 世界最新医学信息文摘. 2019(12)
[2]Structure and function of the contactin-associated protein family in myelinated axons and their relationship with nerve diseases[J]. Yan Zou,Wei-feng Zhang,Hai-ying Liu,Xia Li,Xing Zhang,Xiao-fang Ma,Yang Sun,Shi-yi Jiang,Quan-hong Ma,De-en Xu. Neural Regeneration Research. 2017(09)
[3]Gene expression profile of amyloid beta protein-injected mouse model for Alzheimer disease[J]. Ling-na KONG, Ping-ping ZUO~1, Liang MU, Yan-yong LIU, Nan YANG Department of Pharmacology, School of Basic Medicine, Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100005, China. Acta Pharmacologica Sinica. 2005(06)
本文编号：2940066
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